①病毒液要低溫凍結保存(凍幹保存更好)。小量分裝,以免反複凍融影響效價。
②在固定病毒稀釋血清的試驗中,選用病毒的數量與敏感性關係很大。如病毒量過多敏感性差,保存過程中毒力不斷下降,為確保毒力的穩定可在實驗前傳代兩次,如滴度在10(-7),可將原液稀釋成10(-6),為100TCID50。凍幹保存不需傳代。
③各種病毒感染機體後,血清抗體出現的時間不同。抗體一旦出現就隨病程的發展而增長,並保持一定水平,維持一定時間。因此要求取發病急性期和恢複期雙份血清,以比較其中和指數。
④血清中存在一些非特異性的能增強抗病毒抗體中和作用的物質和滅活病毒的物質,如補體、備解素、幹擾素等。這些物質可用加溫的方法破壞。
⑤必須嚴格要求血清無菌。否則在試驗中可引起動物、雞胚、細胞的非特異性病變及死亡,影響試驗結果。
⑥用感染動物的方法做中和試驗,要選擇同一品種、健康無潛在疾病的同批敏感動物,並要求大小均勻和一定體重,選擇敏感的接種途徑;用雞胚做試驗材料,要選擇發育良好、適宜胚齡的雞胚,選擇敏感的接種途徑;用培養細胞單層作中和試驗,要選用沒老化的敏感單層細胞,並根據不同病毒的要求,確定培養溫度。
2、臨床意義
①測定血清中抗體的滴度,診斷病毒性疾病;觀察人群的免疫水平;注射疫苗後的抗體反應,從而檢測疫苗的效果。
②中和試驗具有很高的特異性,可用已知型別的免疫血清或抗原鑒別病毒的型別,進而分析病毒的抗原性。
③用動物製備免疫血清時,可用中和試驗的方法測定免疫血清的效價。
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