病毒中和試驗有兩種方法：固定血清一稀釋病毒法和固定病毒一稀釋血清法。固定血清一稀釋病毒法應用較普遍 。
（1）固定血清一稀釋病毒法將等量血清與不同稀釋度的病毒相結合，相互作用後接種小白鼠，結果以中和指數表示。
①⑥病毒滴度LD50（半數致死量 ）、EID50（半數雞胚感染量 ）、TCID50（半數組織培養感染量）測定。
②先將病毒製成0.2病毒懸液，然後作一係列10倍遞次稀釋，使之成為0.02，0.002，......。中和試驗選擇的病毒稀釋度範圍，要根據病毒滴定的結果而定。
③將選定的稀釋度病毒分別定量加入兩排無菌試管內。一排每管加入與病毒等量的免疫（或被檢）血清作為試驗組，另一排每管加入與免疫（或被檢 ）血清同樣的正常血清作為對照組。充分搖勻後置37℃水浴作用1h。
④按“病毒滴度測定”的方法接種實驗動物（雞胚或組織培養）。以同樣方法計算試驗組及對照組的LD50（EID50或TCID50）。
⑤結果計算。對照組LD50（EID50或TCID50）減去試驗組LD50（EID50或TCID50）後差數的反對數，為陂檢標本的中和指數。中和指數小於10為陰性，10—50為可疑，大於50為陽性。
（2）固定病毒-稀釋血清法：將定量的病毒與不同稀釋度的血清相結合，作用後接種動物、雞胚或細胞管，以測定血清中中和抗體的效價。
①④⑤病毒滴度LD50、EID50、TCID50測定。
②將試驗血清做係列倍比稀釋，使之成1：2，1;4，1:8……。
③將病毒稀釋成每隻動物（雞胚或細胞管）1/2接種量中含100 LD50（EID50或TCID50），計算病毒稀釋倍數的方法為（以TCID50為例）：
a=lg（TCID50/0.2ml）—lg（中和試驗時1/2病毒接種量）—lg（每管接種量/每管接種病毒量）
上式計算結果的反對數，10（a）即為病毒應稀釋的倍數。
例如，某病毒lg（TCID50/0.2ml）=6.5，中和試驗時1/2接種量（即0.1ml）中含100 LD50，則a=6.5—lg100—lg2=4.2，而10（4.2）=15849，即為病毒應稀釋的倍數。
④不同稀釋度血清與等量病毒相加，搖勻放37℃水浴作用1h，接種動物（雞胚或細胞管）。
⑤結果計算。固定病毒一稀釋血清法中和試驗的結果計算，是計算出保護50%動物不死亡的血清稀釋度。
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