將人或動物離體的活組織或分散的活細胞,在實驗室的試管或培養瓶中,模擬體內的生理條件使之生存和生長,稱為組織培養。包括器官培養、組織塊培養和細胞培養。
1、組織來源
人、猴、齧齒類動物、禽的胚胎和髒器為組織培養常見的組織來源,對於蟲媒病毒可使用蚊組織,手術切除的癌瘤組織可用於建立傳代細胞。組織要保持新鮮,一般須在6h內處理。
2、單細胞的製備
組織分散成單細胞的方法主要有3種:機械分散法、酶消化法、螯合劑分散法。後兩種方法多與機械法結合使用。
(1)機械分散法:適用於細胞間連接較鬆的組織,如雞胚組織。可將雞胚剪成1mm3的小塊,放在底部有一塊銅絲網的10—20ml注射器內,用手的壓力將組織細胞擠過網孔。脾髒組織的分散可將脾組織放在無菌平皿中,用1ml注射器芯輕壓,使細胞出來。
(2)酶消化法:目前主要用胰酶,它能消化細胞間的蛋白質成分。組織塊受胰蛋白酶作用後細胞變為圓形,再用吸管機械吹打或電動攪拌細胞可分散。胰蛋白酶用的濃度過大或時間過長對細胞均有損害,影響細胞的生長。一般用2.5—5g/l的胰酶,消化液量為消化物的5—10倍,37℃作用20—30min,大的組織塊可作用60min,pH值範圍一般在7.4—7.6。
(3)螯合劑分散法:鈣離子和鎂離子是細胞結合的離子。單層細胞在缺少鈣、鎂離子的環境下,細胞變圓,分散為單細胞。乙二胺四乙酸容易與鈣、鎂螯合而使細胞間及細胞與玻璃培養瓶間的鈣、鎂離子螯合,而達到細胞分散的目的,但對於新鮮組織的分散效果不佳,故多用於單層細胞的分散。乙二胺四乙酸不受血清的抑製,所以,消化後需用Hanks液洗去殘留乙二胺四乙酸,以免影響細胞生長。
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