（四）接種與收獲
1、材料
①來亨雞白色受精卵、卵架、檢卵燈。
②碘酒、酒精消毒棉球。
③滅菌的手術刀、鑷子、剪刀、平皿。
④1ml注射器及6號針頭、12號針頭。
⑤乙型腦炎病毒液、單純皰疹病毒液。
⑥流感病毒稀釋液。
⑦磨卵機、透明膠紙。
2、方法
常用接種方法有四種，可根據病毒種類、接種目的不同，采用適當的接種途徑。
（1）卵黃囊接種法
①取6—8日齡雞胚，在檢卵燈下畫出氣室和胎位，置卵盤上，氣室端向上。
②用碘酊、酒精消毒氣室，然後用磨卵器在氣室中央磨一小孔（用砂輪代替磨卵器也可）。
③用碘酊、酒精消毒，以12ml注射器吸取乙型腦炎病毒液，針頭自氣室小孔朝胚胎相反方向旁側斜刺入，深度3cm左右，即達卵中心卵黃囊內。注入量0.2—0.5ml，接種後以無菌蠟封閉小孔。根據接種病毒種類不同，置33—37℃溫箱中培養，每天檢卵一次。
④取孵育24h以上瀕死的雞胚直立於卵盤上，鈍端向上。氣室部位用碘酊、酒精消毒後，用無菌鑷子擊破氣室並除去卵殼。用另一無菌鑷子夾破絨毛尿囊膜和卵膜，取出胚胎，然後夾住卵黃臍帶處，小心收獲卵黃囊。如製塗片，可從中剪一小塊，輕塗於載玻片上，固定、染色、鏡檢。可放低溫冰箱保存，備用。
（2）絨毛尿囊膜接種法
①取10—12日齡雞胚，於檢卵燈上畫出氣室與胎位，並在胎位無大血管處畫一記號。
②將卵直立於卵架上，鈍端向上，先在氣室部位用碘酊、酒精消毒，用磨卵器或砂輪在氣室中磨一小孔，勿傷卵膜。
③將卵平放，無大血管記號處向上，再依次用碘酊、酒精消毒記號處，用磨卵台或砂輪打一長為3—4mm的三角形小口，將卵殼取下，勿損傷殼膜，用注射針頭在殼膜上劃一小縫，勿傷絨毛尿囊膜，將一滴生理鹽水滴於卵膜縫隙處。用針尖刺破氣室囊膜，用大膠球自小孔處吸氣造成負壓，可見生理鹽水下沉，絨毛尿囊膜即凹下，與殼膜已分開，人工氣室製造成功。
④用0.25ml或1ml注射器吸取單純皰疹病毒液0.1—0.2ml，滴於絨毛尿囊膜上，用消毒的熔化石蠟封閉兩口。蠟封部位向上，置37℃孵育4—5d。
⑤將雞卵取出後用碘酊、酒精消毒，以鑷子揭去人工氣室處卵殼並擴大開口，輕提絨毛尿囊膜，用剪子剪下接種麵及周圍的絨毛尿囊膜。置於加有無菌生理鹽水的平皿中觀察病變及作其他檢驗用。
（3）尿囊腔接種法
①常用9—12日齡雞胚，檢卵燈下畫出氣室界限，並在胚胎旁絨毛尿囊膜發育良好無大血管處和氣室交界處畫一記號。
②用碘酊、酒精消毒，以磨卵器或砂輪磨一小孔，劃破卵殼不損傷卵膜，以注射器吸取流感病毒液0.05—0.2ml，刺入殼膜少許，即可達尿囊腔。
③以透明膠紙封閉注射孔，置35—36℃孵育3d取出。
④為防止出血，收獲前先將雞胚置 ,4℃冰箱冷卻7—12h。取出後用碘酊、酒精消毒氣室端，以鑷子式剪子沿氣室周圍除去卵殼，撕去殼膜。以毛細管或注射器穿破絨毛尿囊膜吸取尿液，置無菌瓶中備檢。
（4）羊膜腔接種法
①取9—11日齡雞胚，該部位接種，孵育雞胚時，將氣室端向上，讓胎位接近氣室，便於接種。在檢卵燈下畫出胎位、氣室，用砂輪或磨卵器沿氣室邊緣和胚胎位置靠近處，開一道3mm的淺溝，並開一不損傷卵膜的孔。
②用碘酊、酒精消毒，然後用無菌鑷子揭去殼膜，並滴一滴無菌液體石蠟以使下麵的膜透明，通過透明的膜，可清楚見到整個胚胎。
③用注射器吸取標本，針頭對準開口處向雞胚直下，穿過絨毛尿囊膜、羊膜，進入羊膜腔，注入標本0.1—0.2ml，注射後用膠布封口，膠布下墊一無菌紙塊，然後置35—37℃溫箱孵育3—4d。
④收獲前將雞胚置4℃冰箱7—12或-4℃冰箱30min，將雞胚凍死，以減少收獲時出血。撕去膠布，卵殼以碘酊、酒精消毒，用鑷子撕去卵膜。左手持鑷子夾住羊膜腔，右手用毛細管或帶針頭的注射器吸取羊水，放無菌小試管中備用。
3、結果觀察
檢查接種標本後的雞胚，是否被病毒感染，有兩種方法：直接法和間接法。
（1）直接法僅能看到絨毛尿囊膜上是否形成痘瘡，雞胚是否有特殊的病理變化，是否生長發育緩慢或死亡。如皰疹病毒在絨毛尿囊膜上可形成特殊 的痘瘡；流行性乙型腦炎病毒、新城雞瘟病毒可引起雞胚死亡，可用作感染指標，但必須與接種損傷、標本毒性、細菌汙染相區別。
④接種損傷。接種損傷所引起的死亡，通常散在無規律性，病毒引起的死亡有潛伏期並有一定規律性。
②標本毒性。毒性引起死亡，標本經稀釋後，即不出現死亡。
③細菌汙染。汙染引起死亡，尿液呈灰色、渾濁，雞胚無光澤。
④排除上述三種情況，可確認為臨床診斷指標。
（2）間接法：大部分需要雞胚培養後收獲，利用間接法。如流感病毒用尿液和羊水作血凝和血凝抑製試驗；腮腺炎病毒用雞胚的體液、組織及特異性診斷血清作補體結合試驗；狂犬病病毒注入雞胚腦內，收獲後取腦組織作病理切片或直接塗片查找包含體。由於病毒種類不同，可選擇不同方法作臨床診斷指標。
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