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隱球菌的鑒定



錄入時間:2008-11-21 14:25:17 來源:青島betway必威西汉姆联生物 

1、材料 
(1)標本:腦脊液、痰、膿、尿、活體組織及人體解剖材料等。 
(2)試劑:墨汁、沙氏固體培養基、小白鼠。 
2、方法 
(1)標本采集:采集腦脊液、痰、膿、尿、活體組織及人體解剖材料等。 
(2)直接檢查:將樣品經墨汁染色後鏡檢,查看有無圓形或卵圓形的芽生孢子,孢子外麵有一肥厚的莢膜,莢膜比菌體可大1—3倍。出芽可為單芽,也可為多芽,孢子內可見有一個較大反光顆粒(脂質顆粒)和許多小顆粒。 
(3)培養檢查:將樣品接種在沙氏固體培養基上,置25—37℃培養均可生長,24—48h形成酵母樣菌落,少數菌株生長緩慢,至少要培養2—3周才能形成菌落,菌落呈不規則圓形。開始時為白色,透明發亮,表麵光滑凸起,為酵母型菌落,日久菌落增厚,表麵黏稠。顏色由乳 白、奶油色轉為橘黃色。鏡檢可見有許多芽生細胞,有時也可見到芽管。 
(4)進一步鑒定可做以下試驗:酚氧化酶試驗、尿素酶試驗、糖同化及發酵試驗、PCR檢測等。 
(5)鑒定有無致病性:把分離到的細菌製成懸液,給小白鼠腹腔注射(0.5ml/隻 )或腦內注射(0.02ml/l隻),觀察有無發病死亡的情況。有致病性的新型隱球菌一般於接種小鼠後2—3周內小鼠死亡。 
(6)血清學試驗:腦脊液和血清可用於檢測抗原或抗體,常用乳膠凝集試驗。但在治療收效後,抗原滴度可下降。抗體能凝集隱球菌的酵母細胞或表層上附著的抗原顆粒。   
   

 

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