1、材料
（1）培養基：培養支原體用培養基。
（2）器材及試劑：L玻棒、馬血清、抑菌劑。
2、方法
（1）標本的采集;支原體常侵及人和動物的黏膜表麵，可用滅菌棉拭子取分泌物接種於2—3ml支原體液體培養基的小管中。若標本是組織塊，可在滅菌乳缽或玻璃勻漿器中研成乳漿後接種。取樣後應盡快接種培養。
分離培養：接種固體培養基時轉動拭子使標本液體盡量擠出，用無菌毛細吸管吸取標本1—2滴約0.2ml接種於平板固體培養基上，用L玻捧塗抹使液體標本分布均勻，放在5%—10%CO2環境中37℃培育，3—5d後觀察結果。接種半固體培養基或液體培養基時，接種前半固體培養基在水浴中煮沸至完全融化後，待冷卻至50℃左右加入馬血清、抑菌劑等，搖動使均勻，並待培養基冷至37℃左右，用無菌吸管接種標本0.5ml於培養基中，搖勻後蓋以滅菌膠塞，37℃培育，觀察支原體菌落。液體培養基也如上接種。若有支原體生長，培養基即出現顏色變化。
（2）菌種的純化：在平板固體培養基上用放大鏡或低倍顯微鏡下可見“油煎蛋”狀的典型支原體菌落，可用滅菌小刀切取菌落瓊脂塊，移入液體或半固體中壓碎瓊脂塊進行培養，蓋上膠塞，放37℃。待支原體生長、繁殖，培養基變紅或變黃時，用液體培養基稀釋培養物至10（-4），10（-5），取0.2—0.3ml接種於平板固體培養基上。如上處理，反複分離純化2—3次，即可得支原體純種，保存作鑒定試驗之用。
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