（6）代謝抑製試驗：根據特異性抗體能阻止支原體的生長及代謝這一特性，可采用已知高效價的免疫血清進行代謝抑製試驗 以鑒別各種支原體。測定分解葡萄糖支原體時，可在含0.5——1.0%葡萄糖的支原體培養基中加入抗血清後再接種菌液，培養後未見發酵反應，培養基顏色不變；而未加抗血清的對照管呈發酵反應，培養基變成黃色。如加入的是抗肺炎支原體血清，即被檢測的為肺炎支原體。代謝抑製試驗還可用於感染支原體的患者血清抗體效價的檢測。
（7）反向血凝試驗：取高效價的支原體抗血清先經50%硫酸銨沉澱初步提純後，再經DEAE柱層析獲得純化IgG。先預試確定抗體致敏最適濃度，以鞣酸法將抗體包被於戊二醛化的綿羊紅細胞上。抗體致敏的血細胞遇到相應抗原時，室溫60min，則可出現特異的血細胞凝集反應。試驗證明該法快速，1—2h即可獲得結果，特異性和靈敏度高。
（8）間接表麵免疫熒光試驗：此法的突出優點是能查出分離物中的混合感染株，而不需對分離物事先純化。不需要製備各種支原體高免疫血清的熒光標記抗體，隻要有一種羊抗兔熒光抗體即可。用特異性熒光抗體直接染色固體培養基上的支原體菌落，熒光顯微鏡檢查被染菌落的熒光。當支原體菌落與同源兔抗支原體抗體結合後，再加羊抗兔熒光抗體，三位一體，在熒光顯微鏡下即可見典型的黃綠色熒光菌落。
先確定抗血清最適工作濃度，取支原體診斷血清用生理鹽水製成不同稀釋度（1：20—1：320），分別與已知相應的支原體菌落做間接表麵免疫熒光試驗，在熒光顯微鏡下以菌落著色熒光最強、背景最暗的抗血清最高稀釋度作為最適工作濃度。
將待檢菌株接種支原體固體培養基平板上，置二氧化碳條件下37℃培養5——7d，將帶分散菌落的瓊脂小心切下，菌麵向下貼在潔淨的載玻片上，每塊玻片可放4—8個菌落。將玻片傾斜45°於80℃&蒸餾水容器中，約1min使瓊脂塊溶解滑下，立即用80℃蒸餾水清洗，並用pH7.2的PBS浸洗玻片3次；棄去洗液，室溫幹燥後，加入用pH7.2的PBS稀釋至適宜濃度的抗血清；室溫作用30min，用pH7.2PBS洗 3 次，每次30min，棄去洗液後加入適宜稀釋的羊抗兔熒光抗體，作用30min後，用PBS洗 3 次，最後放4℃冰箱浸洗過夜；棄去洗液，待幹後在熒光顯微鏡下觀察菌落的熒光反應。菌落呈亮黃綠色特異性熒光，形態清晰者為陽性反應，屬同源菌落；無熒光反應者為陰性。試驗時應設陽性對照和加正常兔血清的陰性對照。間接表麵免疫熒光試驗具有較高的特異性和敏感性，缺點必須是活菌培養。
（9）支原體菌數測定法：支原體的計數常采用 以下兩種方法。
①菌落形成單位（CFU）。將待檢樣品用支原體液體培養基以10倍遞增稀釋10（-1）——10（-12），取3個稀釋度（10（-10）——10（-12））菌液0.1ml接種於直徑5cm平板固體培養基上，每個稀釋度接種平板 3 個，輕輕搖動平板，使菌液均勻鋪平成圓形。置二氧化碳條件下37℃培育5—8天；在低倍或倒置顯微鏡下計數生長菌落，計算每毫升內生長的菌落數（CFU/ml）。
②顏色改變單位（CCU）。根據支原體生化反應 的特性在培養其中添加葡萄糖（0.5%）、精氨酸（0.2%）或尿素（0.1%），同時加0.002%酚紅指示劑；對分解葡萄糖支原體，培養基pH值調至7.8；分解精氨酸培養基pH值調至7.0；分解尿素的pH值調至6.0。試驗方法是將培養基分裝於無菌小試管中，每管1.8ml，第1管加入被檢菌液0.2ml，混勻後吸取 0.2ml的至第2管，如此順序進行10倍遞增稀釋10（-1）——10（-12），置37℃培育14d。以培養基顏色不繼續發生改變為終點判定結果。以發生顏色變化的最高稀釋度為顏色改變單位，如當10（-1）——10（-11）發生顏色改變，10（-12）無變化，即試驗結果為CCU=10（-11），亦即被測菌液稀釋至10（-11）仍有支原體生長。
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