1、原理
利用電子顯微鏡的超級放大功能,可直接觀察培養細胞中支原體汙染情況。
2、操怍方法
①細胞傳代至貼有蓋玻片的平皿中;②培養24h取出;③PSB洗滌;④2.5%戊二醛/ PSB固定15min,PSB洗滌;⑤1%鋨酸固定30min,PSB洗滌;⑥乙酸異戊酯脫水;⑦冰點幹燥;⑧噴金;⑨掃描電鏡觀察,照相
綜上所述,幾種不同的方法各有特點,其應用也各有側重。①支原體培養法是最為經濟和可靠的方法,但其實驗周期較長,所以常用於進行對懷疑細胞的最後甄別。②DNA染色法較為快捷,方法簡單,但其靈敏度有一定欠缺,易造成漏檢。③PCR檢測支原體的方法最為快速、靈敏,取樣量少,既可進行細胞檢測也可進行細胞上清的檢測,同時可以檢測8種支原體的汙染,是目前常用的檢測手段。但其成本較高,條件要求嚴格,有時易出現假陽性。其彌補的方法是對懷疑的樣品經過3次PCR檢測,或用培養法檢測。④電鏡法非常直觀、準確,但對使用環境要求高,操作複雜,實驗周期較長,常作為樣品的最後定性檢測。
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