分為平皿菌落計數法、液體培養基直接接種法、薄膜過濾法3種標準。
1、平皿茵落計數法：在藥品防腐劑防腐效力測試以及微生物限度檢查中，通常采用平皿菌落計數法計數每毫升（或克）樣品的微生物含量。參照“驗證試驗用供試品的製備與檢查”進行驗證實驗，對每種試驗菌種來說，每組試驗至少獨立重複3次（即用3個不同批次的樣品）。如果每次試驗結果都表明：樣品試驗組（A）中驗證微生物平均生長數量不低於陽性對照組（C）中驗證微生物平均生長數量的70%，則認為兩組試驗的微生物生長數量相同，原檢驗方法通過驗證。
2、液體培養基直接接種法：無菌試驗中的直接接種法，要求培養基既能中和抗菌劑的抑菌性，又能支持適合廣譜微生物的生長，因此選用的液體培養基應能使樣品中潛在的所有微生物完全能夠生長。按照“驗證試驗用供試 品的製備與檢查”進行驗證試驗，對每種試驗菌種來講，每組試驗至少獨立重複3次。改變產品和培養基的比率以達到中和效果。如果3批（用3個不同批次的樣品）實驗結果均表明：在14d內所有樣品試驗組中的液體培養基都顯示有大量的微生物生長，則相應的試驗方法通過驗證。
3、薄膜過濾法：薄膜過濾方法使用範圍最廣，除適用於無菌產品的無菌檢查外，又適用於非無菌產品的限度檢查。但關鍵是樣品必須能被過濾。有些樣品，如固態粉劑、軟膏或乳劑等，在過濾前需要溶解樣品。針對需要溶解的藥品而通過驗證證明該樣品的溶解方式及整個試驗過程、試驗用具和材料以及培養條件等均不會影響產品中固有微生物的生長。其方法是：
（1）樣品試驗組：將樣品溶液通過濾膜，再用適量的淋洗液淋洗濾膜3次，並在最後一次淋洗液中接入少量（10—100CFU）驗證菌，淋洗後，將濾膜轉移到適當的固體培養基上（或液體培養基中）培養。如果樣品的抑菌性很強（如抗生素），過濾前需要對樣品進行中和處理，那麽，要在過濾前將菌種接入經中和處理過的樣品溶液中，以驗證中和效果。
（2）蛋白腖對照組：樣品為不加產品的A溶液，其他操作及實驗條件與樣品試驗組相同。以考察樣品中和用鈍化劑（針對需要預處理的樣品）過濾器和過濾膜材質是否會影響微生物的生長。
（3）陽性對照組：將與樣品試驗組和蛋白腖對照組等量的同種驗證菌懸液（10—100CFU）直接接種到固體培養基表麵（或液體培養基中）。比較蛋白腖對照組和陽性對照組的微生物生長結果，可估計出過濾器和濾膜所造成的微生物損失數量。
如果3次驗證（用3個不同批次的樣品）試驗結果均表明：上述3組試驗結果間差異均在 70%以上（固體培養）或在培養14d內所有試驗組的液體培養基都顯示生長，那麽，可認為驗證微生物的回收率基本相同，相應的微生物檢驗方法通過驗證。
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