藥檢中各控製菌的檢測主要有大腸埃希菌、沙門菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌的檢查。在建立供試品的控製菌檢查法或原檢查法的檢驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，應對檢查法的可靠性進行驗證，以確認所采用的方法適用於該藥品的控製菌檢查。驗證時，依各品種項下微生物限度標準中的控製菌選擇相應驗證的菌株，驗證大腸菌群檢查法時，應采用大腸埃希菌作為驗證的菌株。驗證試驗按供試液的製備和控製菌檢查法的規定及下列要求進行。
1、驗證用菌株與製備茵懸液：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌。
接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中，生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培養基中，培養18—24h。用0.9%無菌氯化鈉溶液或其他稀釋液製成1ml含10—100CFU的菌懸液。
2、驗證方法：供試品製成供試液後，分別取50—100CFU試驗菌在含供試品（為供試品組）和不含供試品（為活菌組）的條件下，依相應控製菌檢查法進行檢查。供試品組的試驗菌液和供試液應分別加入增菌培養基中。為考察在供試液製備過程中微生物受影響的程度，可用相應的稀釋液替代供品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每1ml含10—100CFU，按供試品組的供試液製備及控製菌檢查法進行控製檢查（為稀釋液對照組）。
同時為了驗證控製菌檢查方法的專屬性，可設陰性菌對照組。方法同上，隻不過是在驗證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌檢查法時的陰性對照菌采用金黃色葡萄球菌；驗證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌檢查法時的陰性對照菌采用大腸埃希菌。陰性對照菌不得檢出。
3、結果判定：陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。活菌組和稀釋液對照組均應檢出試驗菌。若供試品組檢出試驗菌，符合驗證試驗，按此法進行供試品的該控製菌檢查；若供試品組未檢出試驗菌，不符合驗證試驗，應建立新的方法。如采用培養基稀釋法、離心沉澱集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯合使用這此方法消除供試品的抑菌活性，並重新進行方法驗證。
驗證試驗也可與供試品的控製菌檢查同進行。
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