（1）MUG法不必從混合菌中分離單個菌落。除大腸埃希菌外，尚有部分誌賀菌屬、沙門菌屬的菌株，以及少數革蘭陽性球菌、杆菌和芽孢菌，其MUG為陽性。因此，在MUG培養基成分中增加了去氧膽酸鈉，可排除革蘭陽性菌的幹擾。至於誌賀菌、沙門菌在膽鹽乳糖培養基中較難生長，即使有生長，本法也能檢出。既然藥品中不得檢出大腸埃希菌，更不允許檢出誌賀菌、沙門菌。
（2）配製MUG培養基時，務必校正pH，滅菌後pH不得過7.4，否則pH偏高，MUG分解，本身則顯熒光；分裝MUG培養基的試管應挑選，試管、蛋白腖不得顯熒光。
（3）培養時間：供試品培養液接種於MUG培養基中的培養時間，一般在4h、24h 觀察是否產生熒光，如熒光很微弱，不能準確判斷時，該延長培養至48h再觀察結果。由於大腸埃希菌各菌株間的MUG的屬性不完全相同，對底物和底物濃度反應的差異；培養基中選擇因子的影響；培養時間；溫度；pH的改變；大量競爭菌和樣品本身物質成分的幹擾等；對結果的判斷亦有影響。
（4）結果觀察：取供試品的MUG試管、陽性對照管。陽性對照管同時在366nm紫外燈下觀察，陽性對照管應有較強藍白色熒光，陰性對照管無熒光。試品MUG管是否有熒光，應仔細觀察比較，或將各管調換位置（陰性管居中），適當傾斜試管，陽性對照管熒光強烈，影響供試品管與陰性對照管的觀察時，亦該移去陽性對照管。
（5）藥品中汙染的大腸埃希菌，易受生產工藝及藥物的影響。在曙紅亞甲藍瓊脂或麥康凱瓊脂平板上的菌落形態特征有變化時，挑取可疑菌落往往憑經驗，主觀性較大，務必挑選23個以上菌落分別做IMVIC試驗鑒別，挑選菌落越多，挑選陽性菌的機率越高，如僅挑選一個菌落 IMVIC試驗的鑒別，則易漏檢。
（6）在IMVIC試驗中，以滅菌接種針沾取菌苔，首先接種於枸櫞酸鹽瓊脂斜麵上，然後接種於蛋白腖水培養基、磷酸鹽葡萄糖腖水培養基中。切勿將培養基帶入枸櫞酸鹽瓊脂斜麵上，以免產生假陽性結果。枸櫞酸鹽利用試驗培養時間，原定為2d，根據試驗資料，發現培養3d後，枸櫞酸鹽利用試驗產生陽性。僅培養2d是不夠的，故試驗培養時間改為2—4d。
（7）陽性對照試驗是檢查供試品是否有抑菌作用及培養條件是否適宜。陽性對照菌液的製備、計數及加入含供品的培養基中等操作，不能在檢測供試品的無菌室或淨化台上進行，必須在單獨的隔離間或淨化台操作，以免汙染供試品及操作環境。
（8）在各類供試品中檢測大腸杆菌及其他控製菌，按一次檢出結果為準，不準抽樣複檢。檢出的大腸埃希菌及其他控製菌培養物須保留 1 個月，複查。
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