結核分枝杆菌為專性需氧菌，培養要求特殊，生長緩慢，37℃培養4—6周才出現肉眼可見的菌落，人工培養時pH6.5—6.8最為適宜。在液體培養液中生長稍快，2—3周後可見菌膜生長，臨床標本要培養至 , 2個月無菌生長，且連續3次培養均無菌生長才能報告結核分枝杆菌培養陰性。
【材料】
1、結核分枝杆菌在改良羅氏培養液上的培養物。
2、恥垢分枝杆菌在改 良羅氏培養液上的培養物。
【方法及結果】
結核分枝杆菌於改良羅氏培養液上生長情況及菌落特點：生長緩慢，菌落幹燥呈顆粒狀、乳白色或米黃色、不透明、表麵呈皺紋狀、形似花菜心的菌落。
恥垢分枝杆菌在改良羅氏培養液上生長的菌落特點：生長速度較快，5—7天可見菌落，菌落粗糙，有的能產色。塗片抗酸染色呈抗酸陽性菌，多為短杆菌和球杆菌。但非結核分枝杆菌經煮沸1min分鍾即失去抗酸性。
取少許上述兩種培養液上菌落置0.9%鈉溶液小滴中於玻片上研磨，恥垢分枝杆菌很易被乳化，但結核分枝杆菌不易被乳化。
非結核分枝杆菌在液體培養液中生長，看不到結核分枝杆菌那種細菌相互粘連按縱軸平行排列成索狀的現象，即索狀因子陰性。
生化反應：非結核分枝杆菌與結核分枝杆菌的生化反應特性見表 。
表 結核分枝杆菌與非結核分枝杆菌的生化特性
菌種 糖發酵 觸酶 熱觸酶 中性紅 碲鹽還原 索狀因子
結核分枝杆菌 - + - + - +
非結核分枝杆菌 + + + + - + -
觸酶實驗與熱觸酶實驗：
（1）從羅氏培養液上各取生長豐滿的人型結核分枝杆菌與堪薩斯分枝杆菌10mg左右，分別加入含0.067mol/l、PH7.4的PBS至1.0ml，並置於小試管中，製成細菌懸液。
（2）分別將上述2種菌懸液（各1ml）裝入4支小試管中（各0.5ml），取2種菌懸液各1支置68℃水浴內保溫20分鍾，取出後冷卻至室溫，分別向4支菌懸液管內沿管壁徐徐加入新鮮配製的30%H2O2和10%吐溫-80等量混合液0.5ml，勿搖動，觀察結果。
（3）結果觀察：液麵出現氣泡者為陽性，20分鍾內無氣泡為陰性。未經熱處理的2支菌均出現觸酶陽性，經加熱處理後，人型結核分枝杆菌熱觸酶實驗轉為陰性，而非結核分枝杆菌熱觸酶實驗仍為陽性。
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