中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服熱線:400-0532-596
微生物技術資料
文章檢索

形態及菌落觀察



錄入時間:2008-12-3 14:44:35 來源:青島betway必威西汉姆联生物

【原理】  支原體形態多為球形小顆粒和較短的絲狀體,不易鑒別。 
    溶脲脲原體(Uu)在含95%氮氣和5%二氧化碳環境中生長良好。其生長最適pH為5.5—6.5,最適溫度為36—37℃。Uu具有脲酶,能分糖尿素產氨,使含酚紅指示劑的Uu液體培養液pH上升,顏色由黃色變為紅色。再將液體培養物轉種到Uu固體培養液上,能生長成具特征性荷包蛋樣菌落。 
1、液體培養液支原體肉湯培養液80ml,馬血清或小牛血清10ml,酵母浸液10ml,10%尿素溶液0.5—1.5ml,0.4%酚紅溶液0.5ml,青黴素(使其在培養液中的濃度為500—2000U/ml)用1mol/l氯化氫調pH至5.5—6.5,用小試管分裝後置冰箱中備用,每管1.52.0ml。接種標本後,經孵育,若培養液發生由黃變紅的顏色變化,透明無混濁(有別於某些細菌及真菌生長)則可初步判斷為有支原體生長。大多數Uu在24小時內可獲得陽性結果。 
2、固體培養液在200ml支原體肉湯培養液中,加入瓊脂1.2—1.4g,高壓滅菌後冷卻到50℃左右,逐一加人上述添加劑。搖勻,倒人無菌平皿中,待凝固後,置冰箱中備用。Uu在固體培養液上菌落核心呈粗顆粒狀,具極窄的邊,有時呈荷包蛋樣。 
    人型支原體(Mh)在有氧及無氧環境中均能生長,在液體培養液中2—3日可見生長,固體培養液上培養4—5日即可生出菌落。生長條件除需膽固醇外,尚需要精氨酸。生長的最適pH為7.0,最適溫度36—37℃,Mh具有精氨酸脫氫酶,能水解精氨酸產氨,使含酚紅指示劑的Mh液體培養液pH值上升,呈堿性,顏色由橙黃色變為紅色。Mh和Uu一樣,不發酵葡萄糖,這與生殖支原體有區別。將液體培養物轉種到固體培養液上,能生長成具有特征性的荷包蛋樣菌集落。培養液中不加尿素,需加入精氨酸,其他營養成分與Uu相同。觀察結果同Uu。 
    生殖支原體(Mg)能發酵葡萄糖和其他碳水化合物,使培養液pH下降呈酸性,可使含酚紅指示劑的培養液出現由紅色變為黃色的變化,但即使降至6.0以下,Mg仍可存活。Mg不能分糖精氨酸及尿素。它營養要求複雜,須在不含醋酸鉈的SP-4培養液中才能生長,而且生長極緩慢。Mg在固體培養液上,置於含5%—10%二氧化碳和90%—95%的氮環境中,可形成荷包蛋樣集落。 
    肺炎支原體(Mp)以牛心消化液為基礎,加20%小牛血清及新鮮酵母浸液製成的液體或固體培養液。加入青黴素,可防止雜菌生長。初次分離生長緩慢,在含5%二氧化碳下培養,10天長出荷包蛋狀菌落。能發酵葡萄糖產酸,不能利用精氨酸與尿素,可還原美藍,分離培養陽性率不高。 
【材料】以溶脲脲原體為例。 
1、支原體固體培養液。 
2、溶脲脲原體固體培養液。 
3、姬姆薩染色液。 
【方法】 
1、標本采集女性:用擴陰器擴陰後,以無菌拭子取宮頸口分泌物,也可以取羊水,不推薦用尿液;男性:以無菌拭子取尿道分泌物、前列腺按摩液、精液或中段尿培養(中段尿10ml經2000r/min離心10分鍾),取沉渣接種。 
2、接種好的培養液,置於35—37℃含5%—10%二氧化碳培養2—3天,每天觀察結果。 
3、菌落染色鏡檢。 
(1)用低倍鏡在平板上選擇一個菌落,用刀片切下帶菌落的瓊脂塊,置於一載玻片上,菌落麵朝下。 
(2)將載玻片放入80—85℃的水中,見瓊脂發白脫落後取出玻片。 
(3)自然幹燥,姬姆薩染色(染液作1;20稀釋,需染3小時以上)。 
【結果】  經過培養,標本陽性時,培養液呈紅色,低倍鏡下姬姆薩染色觀察,可見菌落被染成藍色,中央深、四周較淺,形狀似荷包蛋樣。   
   

 

上一篇:支原體鑒別技術

下一篇:支原體的分離培養鑒定

首頁 | 關於我們 | 網上商城 | 在線客服 | 聯係我們
業務聯係電話
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
郵箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青島市城陽區錦匯路1號A2棟
產品技術谘詢
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它時段:13105190021
投訴與建議:13105190021 13006536294