出口食品平板菌落計數
中華人民共和國進出口商品檢驗行業標準 SN 0168-92
代替 ZB X09 001-86 Plate count for bacterial colonies in food for export
1 主題內容與適用範圍
本標準規定了出口食品平板菌落計數的方法。
本標準適用於各種出口食品及其原料,有專門規定檢驗方法的除外。
2 設備和材料
2.1 工作台：超淨工作台或放於清潔、光線充足的實驗室裏的水平工作台。瓊脂平板在工作台上暴露15 min,每平板不得超過15個菌落。
2.2 恒溫培養箱：36±1℃。
2.3 恒溫水浴箱：45±1℃。
2.4 均質器。
2.5 振蕩器。
2.6 吸管：1、10和25mL,具0.1mL刻度。
2.7 平皿：直徑為90 mm。
2.8 稀釋瓶：廣口瓶或三角燒瓶,容量為200 mL和500 mL。
2.9 玻璃珠：直徑為5mm左右。
2.10 天平：感量0.1g。
3 培養基和試劑
3.1 平板計數瓊脂。
3.2 75％乙醇。
3.3 稀釋劑：磷酸鹽緩衝稀釋液。
4 操作程序
4.1 樣品製備
4.1.1 以無菌操作取有代表性的樣品盛於滅菌容器內,如有包裝,則用75％乙醇在包裝開口處擦拭後取樣。
4.1.2 製備樣品勻液
4.1.2.1 固體或半固體食品：以無菌操作取25 g樣品,放入裝有225mL稀釋劑的滅菌均質杯內,於8000r/min均質1～2min,製成1:10的樣品勻液。如樣品均質時間超過2min,應在均質杯外加冰水冷卻。
4.1.2.2 幹燥或幹粉食品：以無菌操作取25 g樣品,放入裝有225mL稀釋劑和適量玻璃珠的500 mL稀釋瓶中。迅速振搖,將樣品混勻,製成1 : 10的樣品勻液。振搖時,幅度為30cm,7s內振搖25次,也可用機械振蕩器振蕩15s代替手搖。
4.1.2.3 液體食品: 用滅菌吸管吸取25mL樣品, 放入裝有225mL稀釋劑的500mL稀釋瓶中,按4.1.2.2條中所述方法迅速振搖,製成1:10的樣品勻液。吸取樣品時,吸管插入液麵下不要超過2.5cm。吸管內液體要在2～4s內完全排入稀釋劑中。不要在稀釋劑中吹洗吸管。
4.2 稀釋樣品勻液
4.2.1 用10 mL滅菌吸管準確吸取1:10的樣品勻液10 mL,放入裝有90 mL稀釋劑的200mL, 稀釋瓶中。按4.1.2.2條中所述的方法,迅速振搖。製成1:100的樣品液。從容器中吸取樣品勻液和以後的稀釋操作中,吸管尖不要碰著瓶口。吸入的液體應先高於所要求的刻度,然後提起吸管使其尖端離開液麵並貼在容器內壁將液體調至所要求的刻度。
4.2.2 分別用10mL滅菌吸管按4.2.1條所述方法將樣品勻液製成10倍遞增稀釋的樣品液,如10**-3、10**-4、10**-5……。
4.3 平板接種
4.3.1 對於每一個樣品,選用合適的三個連續稀釋度的樣品液進行平板計數。
4.3.2 分別用滅菌吸管吸取1mL樣品液放入作了適宜標誌的平皿內。每個稀釋度的樣品液用兩個平皿。如果某一樣品液在取出供試部分前的放置時間超過3 min,應按4.1.2.2條所述方法再振搖該樣品液。
4.3.3 分別加12～15mL平板計數瓊脂(已放45＋1℃的水浴中恒溫)到各平皿內。立即將平皿內的樣品液和瓊脂培養基充分混合。混合方法是將平皿傾斜和旋轉。要防止把混合物濺到平皿壁和蓋上。同時將平板計數瓊脂傾入加有1 mL稀釋劑的另一滅菌平皿作空白對照。將樣品液加入平皿後應立即傾注瓊脂培養基,每個樣品從開始稀釋到傾注最後一個平皿所用的時間不得超過20min。
4.4 培養
待瓊脂凝固後將平皿翻轉,立即放進36±1℃的恒溫培養箱內培養48±2h。培養箱應 保持一定的濕度,經48h培養的瓊脂培養基的失重不得超過15％。
4.5 菌落計數和記錄
4.5.1 培養後,立即計數每個平板上的菌落數。25～250個菌落為合適範圍。如果不能立即計數,應將平板存放於0～4℃,但不得超過24 h。
4.5.2 如隻有一個稀釋度的兩個平板上的菌落在合適範圍內, 先計算兩個平板的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每克(毫升)樣品中平板菌落數(下表,樣品1)。
4.5.3 如有兩個稀釋度在合適範圍內,先計算每個稀釋度兩個平板的平均值,再計算兩個稀釋度的平均值,然後計算每克(毫升)樣品中平板菌落數(下表,樣品2)。
4.5.4 當最低稀釋度的兩個平板上都少於25個菌落時,計數這一稀釋度兩個平板上的實際菌落數,計算兩個平板上的平均菌落數,將平均菌落數乘以稀釋倍數,得到估計的平板菌落數。給這個數注上星號(*), 表明該數係從菌落數在25～250這一範圍之外的平板估計所得(下表,樣品3)。
4.5.5 當所有平板上的菌落都超過250時,則應將最高稀釋度的兩個平板的平均菌落數乘以稀釋倍數,得到估計的平板菌落數。給這個數注上星號(*) (意義同4.5.4)(下表,樣 品4)。4.5.6 如果所有稀釋度的平板都沒有菌落,則以小於1乘以最低稀釋倍數報告平板菌落數。給這個數注上星號(*) (意義同4.5.4條) (下表,樣品5)。
4.5.7 同一稀釋度的兩個平板中,一個有25～250個菌落,另一個的菌落多於250個,兩個平板都要計數。計算方法同4.5.2條(下表,樣品6)。
4.5.8 兩個連續稀釋度中的每個稀釋度都有一個平板的菌落數在25～250個範圍內,而另一個的菌落數高於250或低於25,四個平板都要計數。計算方法參照4.5.2條和4.5.3條(下表,樣品7)。
4.5.9 某稀釋度的兩個平板都有25～250個菌落,而另一稀釋度的兩個平板中隻有一個平板的菌落數在 25～250範圍內。四個平板都要計數,計算方法參照4.5.2條和4.5.3條 (下表,樣品8、9)。
4.5.10 蔓延生長菌落 通常有三種不同類型的蔓延生長菌落。第一種類型是鏈狀菌落,菌落之間沒有明顯界線,這些菌落是當瓊脂和試驗物混合時,一個細菌塊被分散所致；第二種類型是在瓊脂和 平皿底之間形成的水膜樣菌落；第三種是在平皿邊緣或瓊脂表麵形成的水膜樣菌落。如果所選擇的平板出現過量的蔓延菌落生長,以致a.被蔓延菌落蓋住的地方,包括由於蔓延菌落造成的抑製生長區麵積超過平板麵積的50％,或b.由於蔓延菌落造成的抑製生長區麵積超過平板麵積的25％,這樣的平板報告為“蔓延菌落”,不予計數。計數其他平板上的菌落數,將這些數值的算術平均值報告為平板菌落數（下表,樣品10）。當有必要計數除以上a.和b.外的蔓延生長菌落時,將三種不同類型的蔓延菌落分別計數。對於第一種類型,如果僅有一條鏈,將它作為一個菌落計。如果有來源不同的幾條鏈, 將每條鏈作為一個菌落計,不要把鏈上生長的各個菌落分開來數。第二種和第三種類型的蔓延生長形成易於鑒別的菌落,即按一般菌落計數,把計數的蔓延生長菌落數同一般菌落數加在一起,計算平板菌落數。
4.5.11 操作者對同一平板複核自己的計數結果,其差異應在5％之內,而其他人對這一平板重複計數,其差異應在10％之內。否則,應找出原因,加以校正。
4.6 計算和記錄數字適宜稀釋度的兩個平板的菌落數平均值或兩個稀釋度的平板菌落數平均值乘以相應稀釋倍數計算出每克(毫升)樣品中平板菌落數。記錄時,隻有在換算到每克(毫升)樣品中平板菌落數時,才能定下兩位有效數字,第三位數字采用四舍五入的方法記錄。也可將樣品的平板菌落數記錄為10的指數形式(見下表中的例子)。
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