附 錄 A 培 養 基 製 備 (補充件)
A1 甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂培養基(MYP)
a. 基礎瓊脂
牛肉膏 1.0g
蛋白腖 10.0g
D-甘露醇 10.0g
氯化鈉 10.0g
瓊 脂 15.0g
酚 紅 0.025g(配成溶液加入)
蒸餾水 稀釋至900mL
b. 50％卵黃液 50mL
c. 多粘菌素B 100 IU/mL
將a.中的前5種成分加入蒸餾水中加熱溶解,校正pH至7.2±0.1,加入酚紅溶液,混勻後分裝燒瓶中,每瓶225 mL。121℃高壓滅菌15min。用時加熱溶化,冷至50℃後每瓶加入50％卵黃液12.5mL和2.5mL多粘菌素B溶液,混勻後傾注滅菌平皿,每皿15～18mL。用前應將平板置室溫約24 h。
注：①50％卵黃液：取鮮雞蛋,用硬刷將蛋殼徹底洗淨,瀝幹,放於70％酒精溶液中浸泡1 h。以無菌操作取出卵黃,加入等量滅菌生理鹽水,混勻後備用。
②多粘菌素B溶液：在50mL滅菌蒸餾水中溶解500 000國際單位的無菌硫酸鹽多粘菌素B。
A2 胰酪腖大豆多粘菌素肉湯
胰酪腖 17.0g
植物腖 3.0g
氯化鈉 5.0g
磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖 2.5g
蒸餾水 稀釋至1000mL
pH7.3±0.1
將上述各成分溶解在蒸餾水中,煮沸2min,分裝大試管,每管15 mL,121℃高壓滅菌15min。臨用時每管加入0.5％多粘菌素B溶液0.1mL混勻即可。
注：多粘菌素B溶液：在33.3mL滅菌蒸餾水中溶解500 000國際單位無菌硫酸鹽多粘菌素B。
A3 酚紅葡萄糖肉湯
(月示)腖 10.0g
牛肉膏 1.0g
氯化鈉 5.0g
葡萄糖 5.0g
酚 紅 0.018g(配成溶液加入)
蒸餾水 稀釋至1000mL
pH7.4±0.1
將除酚紅外的各成分溶解於蒸餾水並稀釋至1000mL。校正pH後加入酚紅溶液,混勻,分裝試管,每管3 mL。121℃高壓滅菌10min備用。最終pH7.4±0.1
A4 硝酸鹽肉湯
牛肉膏 3.0g
蛋白腖 5.0g
硝酸鉀 1.0g
蒸餾水 稀釋至1000mL
pH7.0±0.1
將上述各成分溶解於蒸餾水並稀釋至1000mL。校正pH後分裝試管,每管5mL,121℃高壓滅菌15min。
A5 營養瓊脂
牛肉膏 3.0g
蛋白腖 5.0g
瓊 脂 稀釋至1000mL
pH7.2±0.1
將各成分於蒸餾水中加熱溶解。校正pH後分裝試管,每管5～7mL；或分裝燒瓶,每瓶100～150mL。121℃高壓滅菌15 min。將試管取出,製成斜麵；如製平板,可將滅菌的瓊脂冷至45～50℃傾注滅菌平皿,每皿18～20mL。
A6 L-酪氨酸營養瓊脂
營養瓊脂 100mL
5％滅菌L-酪氨酸懸液 10mL
將100mL營養瓊脂溶化,冷至45℃,加入5％的滅菌L-酪氨酸懸液10mL,充分混勻後,分裝試管,每管3.5mL。製成的斜麵應迅速冷卻防止L-酪氨酸分離而出。
注：L-酪氨酸懸液：將0.5g酪氨酸加10mL蒸餾水混勻,121℃高壓滅菌15min。
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