中華人民共和國進出口商品檢驗行業標準SN 0175-92 代替ZB X09 011-88
Method for detection of campylobacter species in food for export
中華人民共和國進出口商品檢驗行業標準 出口食品中彎曲杆菌檢驗方法
1 主題內容與適用範圍
本標準規定了出口食品中彎曲杆菌的檢驗方法。
本標準適用於出口畜肉、禽肉、水產品和牛奶中彎曲杆菌檢驗。其他出口食品可參照使用。
2 設備和材料
2.1 微需氧培養設備：最佳微需氧條件為5%氧氣、10%二氧化碳和85%氮氣。可用具雙相壓力計的厭氧罐、蠟燭缸、氣袋或其他可代用的裝置。
2.2 天平：稱量2000g,感量0.1g。
2.3 均質器。
2.4 離心機：帶50mL離心管。
2.5 顯微鏡：相差或暗視野。
2.6 培養箱：25,37和42℃。
2.7 水浴箱：37℃。 2.8 注射器：20mL。
2.9 針頭過濾器：濾膜孔隙為0.65μm。
2.10 三角燒瓶：50,250和500mL。
2.11 平皿：90或100mm。
2.12 吸管：1和5mL。
2.13 試管：16mm×125mm,帶螺旋帽。
3 培養基和試劑
3.1 彎曲杆菌增菌肉湯：根據用途,加入1號或2號抗生素溶液製成(A1)。
3.2 彎曲杆菌分離瓊脂(改良Skirrow氏培養基) (A2)。
3.3 含0.18%瓊脂的半固體布氏肉湯(A3)。
3.4 布氏瓊脂(A4)。
3.5 營養肉湯(A5)。
3.6 中性紅溶液(A6)。
3.7 3%過氧化氫溶液。
3.8 氧化酶試驗試劑(A7)。
3.9 亞硝酸鹽檢測(硝酸鹽還原) 試劑(A8)。
3.10 乙酸鉛紙條：將濾紙條浸入飽和乙酸鉛溶液中,然後取出,使其幹燥。
3.11 硝酸鉀。
3.12 甘氨酸。
3.13 氯化鈉。
3.14 鹽酸半胱氨酸(cysteine-HCl)。
3.15 馬尿酸鈉(sodium hippurate)。
3.16 萘啶酮酸(nalidixic acid): 每個圓紙片含30μg。
3.17 頭孢菌新素(又稱先鋒黴素Ⅰ,cephalothin): 每個圓紙片含30μg。
3.18 茚三酮(ninhydrin)。
3.19 丙酮。
3.20 丁醇。
4 增菌
4.1 碎牛肉
使用加有按1號配方配製的抗生素溶液的增菌肉湯。稱取25g樣品,置於均質杯內,加入100mL增菌肉湯,用均質器以8000～10000r/min均質30s。將均質液通過滅菌紗布,倒入一個容量為250mL的三角燒瓶,置微需氧條件下,42℃培養24～48h。
4.2 淨膛全禽和分割禽肉
在一個滅菌容器中,用250mL 滅菌營養肉湯振搖洗滌樣品5min。取肉湯,經滅菌紗布過濾,於23000×g、4℃離心20min,或於16300×g、4℃離心30min,棄去上清液,將沉澱物混懸放在250mL三角燒瓶中的100mL加有按1號配方配製的抗生素溶液的增菌肉湯中。培養方法同4.1條。
4.3 牛奶
使用加有按1號配方配製的抗生素溶液的增菌肉湯。稱取約40g牛奶放入離心管中,按4.2條中的方法離心。棄去脂肪和上清液,將沉澱物混懸放在250mL三角燒瓶內的100mL,增菌肉湯中,培養方法同4.1條。
4.4 貝類
使用加有按2號配方配製的抗生素溶液的增菌肉湯。將100g樣品和100mL增菌肉湯放入均質杯中,用均質器以8000～10000r/min轉速均質30s。用滅菌紗布將均質液過濾。取50mL濾液放在500mL三角燒瓶內的200mL增菌肉湯中,培養方法同4.1條。
4.5 其他食品
所使用的增菌方法決定於食品的種類。蝦、整隻海魚和海魚片經表麵洗滌法(4.2條)處理後,用加有按2號配方配製的抗生素溶液的增菌肉湯增菌。羊肉和豬肉塊可先用表麵洗滌法處理,再用加有按1號配方配製的抗生素的肉湯增菌。碎肉按4.1條所列方法處理。液體食品按4.3條所列方法處理。各種樣品的培養方法均同4.1條。 5 分離和初步鑒定 取5mL經24～48 h增菌的培養物,以0.65μm孔徑濾膜過濾。取經過濾和未經過濾的增菌培養物,分別在分離用瓊脂平板上劃線接種,各不少於兩個平板。將平皿置微需氧條件下42℃培養24～48h。檢查平板上有無透明-白色-棕黃色(可能出現淺紅色)凸起、邊緣不整齊、有時沿接種線向外擴散的菌落。挑取典型菌落製作濕片,用相差(或暗視野)顯微鏡檢查,本菌呈現快速的螺旋樣運動。塗片作革蘭氏染色鏡檢時,本菌為革蘭氏陰性,如小逗點狀,兩菌體的末端相接時,呈S形、海鷗展翅形或螺旋狀。挑取初步鑒定為彎典杆菌菌落,在布氏瓊脂上劃線作純分離。培養方法同上。根據生化、生長特性和抗生素 敏感性試驗進行菌株證實。
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