6 證實
6.1 生化試驗 從用作純分離的平板挑選2個典型菌落。從每個典型菌落各挑取一滿接種環,分別接 種於放在50mL三角燒杯中的4mL布氏肉湯中,置微需氧條件下42℃培養24～28 h。同時接種一份已知陽性培養物,以在整個證實試驗中作為對照。在大多數情況下,用於生長試驗和生化反應的基礎培養基是含0.18%瓊脂的布氏肉湯。這種培養基分裝在16mm×125mm試管中,每管7mL。從所有布氏肉湯中取出各接種物,滴加0.2～0.3mL於瓊脂表麵。6.1.1 生長溫度試驗
接種3管含0.002%中性紅(NR)的基礎培養基,其中一管置37℃培養,檢查在這一溫度下的生長情況,並用於觀察過氧化氫酶反應。另兩管分別置42℃和25℃培養。每日檢查有無生長。對未生長者需培養5d,方可作出最後判斷。彎曲杆菌的生長應隻限於接近培養基表麵的一薄層,廣泛的生長不是由於彎曲杆菌屬細菌所致。
6.1.2 過氧化氫酶試驗
滴加3%過氧化氫溶液於顯示有細菌生長的試管內,出現氣泡者為陽性反應。
6.1.3 氧化酶試驗
使用瓊脂平板表麵經24h培養的生長物(也可取用於抗生素試驗的平板),將氧化酶試劑滴於棉拭子上,並用棉拭子去接觸表麵生長物。在接觸點出現深藍色斑點者為陽性。
6.1.4 硝酸鹽還原試驗
將供試培養物接種於含1%硝酸鉀的基礎培養基。置空氣中於37℃培養5d。加入亞硝酸鹽檢測試劑甲液和乙液(A8),出現紅色者表明硝酸鹽還原成亞硝酸鹽,為陽性反應。
6.1.5 1%甘氨酸中生長試驗
將供試培養物接種於加有NR和1%甘氨酸的基礎培養基。置空氣中於37℃培養。每日檢查有無生長,對未生長者需培養5 d,方可作出最後判斷。
6.1.6 3.5%氯化鈉中生長試驗
將供試培養物接種於加有NR和3.5%氯化鈉的基礎培養基。置空氣中於37℃培養。每日檢查有無生長,對未生長者需培養5 d,方可作出最後判斷。
6.1.7 硫化氫產生試驗
將肉湯培養物接種於加有0.02%鹽酸半胱氨酸的基礎培養基,將一根浸有飽和乙酸鉛的濾紙條懸於試管的上部(不讓濾紙條接觸培養基),旋緊試管帽。置空氣中於37℃培養。每日檢查,觀察濾紙條是否變黑,紙條變黑表明有硫化氫產生,為陽性反應。對未出現陽 性反應者需培養5d,方可作出最後判斷。
6.1.8 馬尿酸鹽水解試驗
馬尿酸鹽水解培養基即1%滅菌馬尿酸鈉溶液,可用試管分裝,每管0.4mL,凍存備用。用2mm接種環取一滿環在瓊脂平板上培養過夜的生長物,接種1%馬尿酸鈉溶液中,振搖試管以分散培養物,置37℃水浴中放置2h。在每個試管中加入0.5mL茚三酮試劑[將3.5g茚 三酮溶於100mL1:1丙酮和丁醇的混合物中],將試管於室溫下放置2 h。出現紫色者為陽性反應。
6.2 抗生素敏感性試驗
用滅菌棉拭子將預先準備的布氏肉湯培養物塗布於布氏瓊脂平板。將含頭孢菌新素(30μg)和萘啶酮酸(30μg)的圓紙片分別貼於平板表麵。置微需氧條件下於37℃培養24h,檢查有無抑菌圈。
6.3 根據下表對細菌作出鑒定 彎曲杆菌的特性鑒別
彎 曲 杆 菌 試驗項目
胎兒彎曲杆菌胎兒亞種 空腸彎曲杆菌 結腸彎曲杆菌 NARTC**1)
過氧化氫酶 ＋ ＋ ＋ ＋
氧化酶 ＋ ＋ ＋ ＋
硝酸鹽還原 ＋ ＋ ＋ ＋
半胱氨酸形成H2S ＋ ＋ ＋ ＋
1%甘氨酸中生長 ＋ ＋ ＋ ＋
3.5%氯化鈉中生長 － － － －
37℃生長 ＋ ＋ ＋ ＋
25℃生長 ＋ － － －
42℃生長 － ＋ ＋ ＋
馬尿酸鹽水解 － ＋ － －
萘啶酮酸試驗 R**2) S**2) S R
頭孢菌新素試驗 S R R R
注：1) NARTC為抗萘啶酮酸嗜溫彎曲杆菌。 2) R為耐受; S為敏感。
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