附 錄 A 培養基和試劑 (補充件)
A1 彎曲杆菌增菌肉湯
基礎液(布氏肉湯)
胰蛋白腖: 10.0g
蛋白腖: 10.0g
葡萄糖: 1.0g
酵母浸膏: 2.0g
氯化鈉: 5.0g
亞硫酸氫鈉(NaHSO3) : 0.1g
蒸餾水: 1000mL
將各成分溶於蒸餾水中。121℃高壓滅菌15min。最終pH7.0±0.2,分裝於規格適宜的燒瓶。
FBP濃原液
硫酸亞鐵(FeSO4): 2.5g
焦亞硫酸鈉(Na2S2O5): 2.5g
丙酮酸鈉(sodium pyruvate): 2.5g
將各成分溶於100mL蒸餾水中,經0.20μm濾膜過濾除菌,存於4℃。每100mL經滅菌的基礎液中加1mL,混勻。
1號抗生素溶液
萬古黴素：0.75 g
三甲氧苄氨嘧啶乳酸鹽(trimethoprimlactate): 0.38g
多粘菌素B: 250 000 IU
將各成分溶於500mL蒸餾水中,經0.20μm濾膜過濾除菌。每100mL經滅菌的基礎液中 加1mL。
2號抗生素溶液
利福平(rifampicin) : 0.2g
三甲氧苄氨嘧啶乳酸鹽：0.2g
多粘菌素B: 200 000 IU
放線菌酮(actidione) : 2.0g
將各成分置200mL容量瓶中,加入95%乙醇50mL,振搖使溶解,加入蒸餾水至200mL。過濾除菌,每100mL經高壓滅菌的基礎液中加1mL。
A2 彎曲杆菌分離瓊脂(改良Skirrow氏培養基)
基礎液
蛋白腖：15.0g
胰蛋白腖：2.5g
酵母浸膏：5.0g
氯化鈉：5.0g
瓊脂：15.0g
蒸餾水：1000mL
加熱並攪拌使瓊脂溶化,121℃高壓滅菌15min。冷至50～55℃,最終pH7.4±0.2。 FBP濃原液：
同A1中FBP濃原液,每100mL經滅菌的基礎液中加1mL。
抗生素溶液
萬古黴素: 0.5g
三甲氧苄氨嘧啶乳酸鹽：0.25g
多粘菌素B：125000 IU
蒸餾水：500mL
將各成分溶於500mL蒸餾水中,經0.20μm濾膜過濾除菌,每100mL經高壓滅菌的基礎液中加1mL。
凍溶脫纖維羊(或馬)血
將羊(或馬)血反複凍融3次,使血球完全溶解,每100mL基礎液中加入5mL。混勻後倒入平皿,每皿20mL。
A3 含0.18%瓊脂的半固體布氏肉湯
將1.8g瓊脂加於1000mL布氏肉湯(A1中基礎液),加熱並攪拌使瓊脂溶化,分裝16mm×125mm試管,每管7mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH7.0±0.2。
A4 布氏瓊脂
將15g瓊脂加於1000mL布氏肉湯(A1中基礎液),加熱並攪動使瓊脂溶化,煮沸1min。121℃高壓滅菌15min,最終pH7.0±0.2。
A5 營養肉湯
牛肉膏：3.0g
蛋白腖：5.0g
蒸餾水：1000mL
將各成分加於蒸餾水中,並加熱溶解。分裝試管時,每管10mL,分裝500mL三角燒瓶時,每瓶225mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH6.8±0.2。
A6 中性紅溶液
將中性紅2.0g溶於1000mL蒸餾水中,在培養基滅菌前加入,每100mL培養基中加入1mL。A7 氧化酶試劑
N,N,N,N-四甲基對苯二胺鹽酸鹽(N,N,N,N-tetramethyl-p-phenylenediamine·2HCl): 1.0g
蒸餾水：100mL
這是一種應首先選用的試劑。將新鮮配製的試液直接滴於瓊脂平板或斜麵的培養物上。氧化酶陽性菌落顯粉紅色,並逐漸變紫。宜用幼嫩培養物進行試驗,臨用時配製試劑,但如果試劑是避光冷藏,可用7d。也可將培養物置於浸透有試劑的濾紙條上。必須用鉑絲挑取培養物,用含鐵的金屬絲會出現假陽性反應。也可用1%N,N-二甲基對苯二胺鹽酸鹽(N,N-dimethyl-p-phenylenediamine hydrochloride)溶液直接加於平板或斜麵培養物上。要保存培養物時,須在3min內將試劑完全倒出,因試劑對細菌有毒性。A8 亞硝酸鹽檢測(硝酸鹽還原)試劑 甲液: 將0.02gN-(1萘)乙二胺鹽酸鹽[N-( I naphthyl) ethylenediamine·2HCl] 加於100mL 1.5mol/L鹽酸中,在通風櫃中微加熱溶解
乙液: 將1.0 g對氨基苯磺酸加於100mL 1.5mol/L鹽酸中,在通風櫃中微加熱溶解。
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