2.2.2.3 PCR一變性梯度凝膠電泳 (PCR．denaturing g radient gelelectmphoresis。PCR．DGGE)PCR．DGG最初被用來監測基因突變。 後來被廣泛的應用於微生物研究，目前國外已將該技術已廣泛用於食品中乳酸杆菌菌株的篩選、分組、鑒定以及對食品品質評估 和質量控製。TABASCO等2007年用PCR．DGGE技術成功的將發酵奶製品中的保加利亞乳酸杆菌、嗜酸乳酸杆菌、類幹酪乳酸杆菌、雙歧杆菌、嗜熱鏈球菌等進行了鑒別， FONTAN等也用同樣的技術將真空包裝牛肉中的清酒乳酸杆菌、彎曲乳酸杆菌、 冷明串珠菌區分出來。由於PCR．DGGE可以區分含堿基成分不同而片段大小一致的DN A序列，甚至一個堿基對的不同都會引起DN A片段停留於凝膠的位置各異，所以與傳統乳酸杆菌的鑒定技術相 比，具有快速、全麵的特點。同時DGGE技術也有其限製性，主要表現在：① 隻能分離較小的片段(最長達1 0 0 0 b p) ，因此提供的信息有限，片段太長時解離率下降。②DGG在種水平上鑒定細菌菌群結構有限。③依據16S r DNA的DGGE研究菌群多樣性，由於某些種類16 Sr DNA的拷貝之間的異質性問題及異源核酸雙鏈分子的檢出可能會導致自然菌群 中細菌數量的過多估計。
2.2.2.4 多重PCR( multiplex PCR) 由於乳酸杆菌種類繁多，菌群組成複雜， 因此傳統的PCR方法難以達到多種乳酸杆菌快速同時鑒定的目的， 這一不足可以通過在單一反應中同時擴增多個位點的多重PCR預以彌補。由於多重PCR同時擴增多個目的基因，具有節省時間、 降低成本、提高效率的優點，所以一經提出即得到研究者的青睞，並且發展迅速，現已成為乳 酸杆菌分類鑒定的一項成熟而重要的研究手段。已有學者利用這項技術同時將嗜酸乳酸杆菌、幹酪乳酸杆菌、德氏乳酸杆菌、 瑞士乳酸杆菌、 鼠李糖乳酸杆菌、 植物乳酸杆菌區
分開來。其它一些乳酸杆菌如短乳酸杆菌、發酵乳酸杆菌、 希氏乳酸杆菌、 食果糖乳酸杆 菌等都可以應用多重PCR方法進行一次性鑒別。該技術的難點在於引物的設計和PCR擴增條件的標準化等，此外，對操作者技術要求較高並且多重PCR的結果特異性較差。
2.2.2.4 多重PCR(multiplex PCR)由於乳酸杆菌種類繁多，菌群組成複雜， 因此傳統的P CR方法難以達到多種乳酸杆菌快速同時鑒定的目的，這一不足可以通過在單一反應中同時擴增 多個位點的多重PCR預以彌補。由於多重PCR同時擴增多個目的基因，具有節省時間、降低成本、提高效率的優點，所以一經提出即得到研究者的青睞，並且發展迅速，現已成為乳 酸杆菌分類鑒定的一項成熟而重要的研究手段。已有學者利用這項技術同時將嗜酸乳酸杆菌、幹酪乳酸杆菌、德氏乳酸杆菌、 瑞士乳酸杆菌、 鼠李糖乳酸杆菌、 植物乳酸杆菌區
分開來。其它一些乳酸杆菌如短乳酸杆菌、發酵乳酸杆菌、希氏乳酸杆菌、食果糖乳酸杆菌等都可以應用多重PCR方法進行一次性鑒別。該技術的難點在於引物的設計和PCR擴增條件的標準化等，此外，對操作者技術要求較高並且多重PCR的結果特異性較差。
3 展望
由於乳酸杆菌對人體的作用存在株的差異，同一種內不同株間其功能和特性各異，因此對 於乳酸杆菌種株水平鑒定技術的研究已成為國內外研究的焦點，也是確保含有乳酸杆菌食品安全性的重要保障。目前，各種核酸技術在乳酸杆菌鑒定中的應用都還處於探索性階段且各有優缺點，PCR方法隻能夠對一部分乳酸杆菌進行鑒別，PFGE分型方法中仍然存在著不能被鑒定的同源性菌株，未來的研究中發展和完善現有的核酸分型技術，創建更新更完備的分 型鑒定方法將是各國學者潛心研究的重點。目前，基因芯片技術發展迅速，並越來越多的應用於微生物的分型和鑒定，在各種核酸分型鑒定技術成熟穩定後，建立乳酸杆菌的基因芯片技術將指日可待。
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