2、材料與方法
為了研究正常糞便中微生物菌群的組成,分別從224頭10周齡仔豬和256頭16~20周齡生長豬中采集各頭試驗豬的糞便樣本,樣本采集後不進行混合。試驗豬飼養在正常的生產條件下,同時參加飼喂數種不同飼料組成的飼養試驗。試驗豬分數個飼喂組淇中試驗仔豬分17個組,生長豬組分16組),每組有12~18頭豬。試驗時測定每組豬的平均日增重fDw。
另外,為研究水解啤酒酵母ProgutTM(芬蘭SuomeRehu公司生產)對糞便中微生物菌群和動物生長的影響究,特收集60頭10周齡仔豬的糞便樣本。試驗時將這6頭10周齡仔豬分成5個飼喂組,每組12頭;其中2個組的仔豬從5周齡開始飼喂常規的斷奶料(對照料),另3個組的仔豬飼喂相同的斷奶料,但在斷奶料中添加水解酵母(i式驗料)=分別測定各組仔豬的平均日增重。
糞便樣本采集後,進行細菌細胞分離,並利用一種基於FCM、16S—rRNA雜交技術和DNA染色技術的方法進行分析rVaahtovuo,2005)。糞樣保存在磷酸鹽緩衝鹽水(Phosphate—BufferedSaline,PBS)中,細菌用離心法分離。細菌細胞用多聚甲醛定型後,再用PBS衝洗數次,重新保存在含50%乙醛的PBS中。定型後的細菌細胞置於一20℃冰箱保存,用能作為各種細菌屬和細菌群靶子的核苷酸探針進行分子雜交(Lay,2005;Sghir,2000;Suau,2001),隨後根據SYTOX。DNA染色法(分子探針,美國俄勒岡,Jq慟:金公司生產)染色,用流式細胞術分析。此外,統計總細菌數(DNA染色的細菌數量),以綜合方式描述微生物菌群的MBI值可根據以下方程(專利保護)計算獲得:MBI--(A+B)/(c+D)。式中:A為雙歧杆菌數;B為糞球菌屬細菌(FaeealibaeteriumPrausnitzil)數;C為類杆菌屬一卟啉菌屬一普氏菌屬菌群(BacteroidesPorphyromonasPre—votellagroup)的細菌數;D為腸道菌群細菌數。分別對每個樣本的細菌數量和微生物平衡指數值進行統計。
利用t柃驗分析兩個具有不等方差的獨立樣本集,用Pearson氏相關係數和回歸分析法評估微生物平衡指數與平均日增重間的相關性,所有分析結果的顯著性差異均設為P<O.05。
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