6、檢驗步驟_檢驗步驟見圖所示.(略)
6.1增菌
稱取檢樣25g，加入裝有225mL堿性蛋白腖水（APW）的廣口瓶內。固體樣品應以均質器9000r/min~10000r/min打碎，或以剪刀充分剪碎。（36±1）℃培養6h~8h和16h~24h。
如為牡蠣樣品，應同樣製備另一份檢樣，置於APW中，42℃培養6h~8h和16h~24h。
6.2分離
以3mm~5mm接種環取6h~8h和16h~24h增菌培養液的表麵生長物一環分別劃線家終於TCBS瓊脂平板至少各一個，於（36±1）℃培養18~24h。
在TCBS瓊脂上，典型的霍亂弧菌菌落為大的，光滑，黃色，稍平，具有不透明中心和半透明的邊緣。
6.3初步鑒定
6.3.1用接種環挑取TCBS瓊脂平板上2~5個可疑菌落，劃線於T1N1瓊脂平板上，（36±1）℃培養12h~18h。
6.3.2以無菌白色濾紙沾取T1N1瓊脂表麵培養物，滴加氧化酶試劑進行氧化酶試驗。
6.3.3以無菌環取氧化酶陽性的培養物於0.5%去氧膽酸鈉液試劑滴中，進行粘絲試驗。
6.3.4以接種針取氧化酶和粘絲試驗陽性的培養物，接種TSI、KIA和AGS，穿刺底層並劃線斜麵。
6.3.5以接種針取上項相同培養物接種T1N0和T1N3肉湯。
6.3.6將TSI、KIA、AGS、T1N0和T1N3肉湯於（36±1）℃培養18h~24h。
表1 霍亂弧菌與相關細菌在初步鑒定試驗中的反應
KIA TSI AGS T1N0 T1N3
斜麵 底層 斜麵 底層 斜麵 底層
霍亂弧菌 K A A(K少見)A K a + +
擬態弧菌 K A K(A少見)A K A + +
副溶血性弧菌 K A K A K A - +
溶藻弧菌 K A A A K A - +
創傷弧菌 K或A A K(A少見) A K A - +
嗜水氣單胞菌 K或A A K或A A K K + -
類誌賀鄰單胞菌K或A A K或A A ND ND + -
注：K—堿性；A—酸性；a—微酸性；ND—未鑒定。
弧菌屬細菌在TSI、KIA、AGS中不產生H2S,也不產氣。一些契單胞菌屬菌株可能產氣。
6.4 確認試驗
以接種環取初步鑒定試驗符合霍亂弧菌反應的T1N3培養物，分別接種到以下培養基：
Hugh—Leifson葡萄糖肉湯(HLGB)，（36±1）℃培養18h~24h。
ONPG腖水，（36±1）℃培養，1h~3h或24h。
賴氨酸脫羧酶肉湯，（36±1）℃培養24h~96h。
阿拉伯糖肉湯，（36±1）℃培養24h。
O/129試驗用培養基，（36±1）℃培養18h~24h。
表2 霍亂弧菌的生化性狀
生化項目 生化性狀 生化項目 生化性狀
TCBS Y D－甘露醇 ＋
AGS Ka 氧化酶 ＋
NaCl 0％ ＋ ONPG ＋
3％ ＋ V－P v
6％ － 精氨酸雙水解酶 －
8％ － 賴氨酸脫羧酶 ＋
10％ － 鳥氨酸脫羧酶 ＋
42℃生長 ＋ 抑菌試驗
蔗糖 － 10μgO/129 S
D-纖維二糖 － 150μgO/129 S
乳糖 － 明膠酶 ＋
阿拉伯糖 － 尿素酶 －
D－甘露糖 ＋
注：Y－黃色；K－堿性；a－微酸性；＋－80％或更多的菌株陽性；v－依據種或菌株的可變反應；S－敏感；AGS－精氨酸-葡萄糖斜麵。
所有試驗均不產硫化氫和氣體。
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