9.7 胰腖大豆瓊脂斜麵(TSA)
胰 腖 15.0g
植物蛋白腖 5.0g
氯化鈉 30.0g
瓊 脂 15.0g
蒸餾水 1000mL
將各成分加入水中,要不斷攪拌,加熱至煮沸1min。分裝於15mm×150mm試管,每管 3mL。121℃高壓滅菌15min後製成斜麵,最終pH7.3±0.2。
試劑: 10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液 10g/Lα-萘酚乙醇溶液
將配好後的10g/L鹽酸四甲基對苯二胺溶液置於密塞棕色玻璃瓶中,於5～10℃存放。此試劑極易氧化,宜現用現配。試驗時,取37℃18～24h的胰腖大豆瓊脂斜麵培養物1支。將兩種試劑各2～3滴從斜麵上端流下,2min內呈現藍色者為細胞色素氧化酶試驗陽性。
9.8 靛基質試驗用培養基(I) 培養基同9.6的30g/L氯化鈉胰腖水。
靛基質試劑〔柯凡克(KOVAS)氏試劑〕:
對二甲氨基苯甲醛 10.0g
純戊醇 150.0mL
濃鹽酸 60.0mL
將試劑溶於戊醇中,然後慢慢加鹽酸,加熱至60℃後,呈深黃色,靜置6～7h,變成黃色即可使用。試液宜小量配製,冰箱保存。久存後,試液變為黃褐色,不可繼續使用。
在30g/L氯化鈉胰腖水18～24h培養液中,滴加柯凡克試液0.1mL。出現紅色環者為陽性,出現黃棕色環者為陰性。
9.9 氨基酸試驗用培養基
9.9.1 賴氨酸脫羧酶培養基(LD)
酵母浸膏 3.0g
葡萄糖 1.0g
氯化鈉 30.0g
L-賴氨酸 5.0g
溴甲酚紫 0.016g
蒸餾水 1000mL
除溴甲酚紫外,將各成分加入蒸餾水中,攪拌均勻,靜置約10min,加熱至完全溶解,調至pH6.7±0.1。分裝於10mm×100mm試管,每管1mL。121℃高壓滅菌10min。滅菌後應立即取出放涼,接種培養後,培養基顏色變為深紫色的為陽性反應,變為黃色的,為陰性反應。
9.9.2 精氨酸雙水解酶試驗用培養基(AD) 基礎培養基同賴氨酸脫羧酶試驗用培養基,精氨酸加入量同賴氨酸量。
9.10 V-P半固體瓊脂(VP)
酵母浸膏 1.0g
蛋白腖 12.0g
葡萄糖 10.0g
氯化鈉 30.0g
瓊 脂 3.0g
蒸餾水 1000mL
將各成分加入蒸餾水中,靜置約10 min,攪拌、加熱至溶解。調pH7.3±0.1,分裝於 10mm×100mm試管,每管1mL,121℃高壓滅菌10min。滅菌後,立即取出放涼。
V-P試劑:
甲液:α-萘粉 6.0g
純乙醇 100.0mL
乙液:氫氧化鉀 40.0g
肌 酸 0.3g
蒸餾水 100.0mL
先將氫氧化鉀溶於水中,再加入肌酸。
以上試劑保存於冰箱中,可使用兩個月。試驗時,分別加甲液0.2mL(約6滴)和乙液 0.1mL(約3滴)。加入試劑後呈現紅色者為陽性,銅色為陰性。對陰性結果1h後再做一次檢查。9.11 糖類分解試驗用培養基
蛋白腖 10.0g
牛肉浸膏 3.0g
氯化鈉 30.0g
溴甲酚紫 0.04g
蒸餾水 1000mL
除溴甲酚紫外,將各成分加熱溶解,按1％量加入糖類。調至pH7.0±0.2,加入溴甲酚紫。分裝於10mm×100mm試管,每管1mL,112℃高壓滅菌15min。
9.12 42℃生長試驗用培養基
胰 腖 17.0g
大豆腖 3.0g
氯化鈉 30.0g
磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖 2.5g
蒸餾水 1000mL
除葡萄糖外,將各種成分混合溶解,煮沸1～2min,加入葡萄糖。調至pH7.3±0.2。分裝於15mm×150mm試管,每管7mL,121℃高壓滅菌15min。
9.13 O/F試驗用培養基(HLGB)
蛋白腖 2.0g
酵母浸膏 0.5g
氯化鈉 30.0g
葡萄糖 10.0g
溴甲酚紫 0.015g
瓊 脂 3.0g
蒸餾水 1000mL
將各成分(除溴甲酚紫外)加於蒸餾水中加熱溶解,調至pH7.4,加入溴甲酚紫,混勻, 分裝於15mm×150mm試管,每管3mL,121℃高壓滅菌15min。
本培養基用於鑒別革蘭氏陰性細菌對於葡萄糖的發酵型和氧化型代謝作用。將同一菌株接種於2 支該培養基中,其中一支管的培養基上麵加滅菌礦物油脂來隔離氧氣,而另一支管不加。這樣發酵型細菌在兩管培養基中均產生酸性反應,氧化型細菌則在未加礦物油脂的管中產生酸性反應,而在加油脂的培養管中隻有輕度或者不生長也無反應變化。
9.14 神奈川現象試驗用我妻氏瓊脂(WA)
酵母浸膏 3.0g
蛋白腖 10.0g
氯化鈉 70.0g
磷酸氫二鉀 5.0g
甘露醇 10.0g
結晶紫 0.001g
瓊 脂 15.0g
蒸餾水 1000mL
調至pH8.0(不必高壓),加熱30min,待冷至50℃,按5％的體積輕輕加入事先準備好的以生理鹽水洗三次的新鮮人或兔血球。混合均勻傾注平皿,充分幹燥後使用 。
注:新製備的培養基均應用已知陽性及陰性菌進行測試,以保證培養基質量。
如要求一定量樣品中不得有副溶血性弧菌,則可將樣品接種於9倍量的60g/L氯化鈉蛋白腖水(前增菌)或多粘菌素B肉湯(直接增菌),以下操作按上列程序進行。
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