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我國行業標準-出口食品中霍亂弧菌檢驗方法——2.1



錄入時間:2008-12-25 13:43:02 來源:青島betway必威西汉姆联生物

      A5  T1N1瓊脂
胰腖                        10.0g
氯化鈉                      10.0g
瓊脂                        20.0g
蒸餾水                      1000mL
將各成分加熱蒸餾水中,充分混勻,攪拌加熱直至煮沸。121℃高壓滅菌15min。最終pH(7.2±0.2)。傾注平板備用。
在上項成分中改變氯化鈉的含量(T1N0:不加氯化鈉;T1N3:氯化鈉為30.0g),去除瓊脂可製成T1N0和T1N3肉湯。
A6  精氨酸葡萄糖斜麵瓊脂(AGS)
蛋白腖                      5.0g
酵母浸膏                    3.0g
胰腖                        10.0g
氯化鈉                      20.0g
葡萄糖                      1.0g
精氨酸                      5.0g
檸檬酸鐵胺                  0.5g
硫代硫酸鈉                  0.3g
溴甲酚紫                    0.02g
瓊脂                        13.5g
蒸餾水                      1 000mL
將各成分加入蒸餾水中,充分混勻,攪拌加熱至煮沸約1min。最終pH(6.8~7.0)。分裝13mm×100mm試管,121℃高壓滅菌15min,高壓後製成高層斜麵備用。
A7  Hugh-Leifon葡萄糖肉湯(HLGB)
蛋白腖           5.0g  
酵母浸膏          0.5g  
氯化鈉              30.0g  
葡萄糖           10.0g  
溴甲酚紫                   0.015g  
蒸餾水                     1 000Ml
將各成分(除溴甲酚紫外)加入蒸餾水中,充分混勻,攪拌加熱溶解,調節pH7.4,加入溴甲酚紫,混勻,分裝於15mm×150mm試管的三分之一容量,121℃高壓滅菌15min。
接種後覆蓋約1mL滅菌礦物油以檢查葡萄糖發酵。
A8  賴氨酸脫羧酶肉湯(Moeller)
蛋白腖                     5.0g
牛肉浸膏                   5.0g
葡萄糖                     0.5g
溴甲酚紫                   0.01g
甲酚紅                     0.005g
吡哆醛                     0.005g
蒸餾水                     1 000mL
將各成分溶於蒸餾水中,輕輕攪拌加熱至溶解。溶解L-賴氨酸10.0g。分裝3mL於13mm×100mm試管中。另以不加氨基酸的基礎液作試驗對照。121℃高壓滅菌10min,接種後覆蓋約1mL礦物油。最終pH(6.0±0.2)。
A9  MR-VP肉湯
(月示)腖           7.0g  
葡萄糖           5.0g  
磷酸氫二鉀                  5.0g  
蒸餾水                      1000.0mL  
將各成分溶於800mL蒸餾水中,微熱過濾,冷卻至20℃,稀釋到1000mL。121℃高壓滅菌12min~15min。最終pH(6.9±0.2)。
A10  ONPG腖水
1%蛋白腖水(pH7.5)        300.0mL
ONPG溶液                  100.0mL
  稱取磷硝基酚-β-D-半乳糖苷0.6g溶於0.01mol/L磷酸氫二鈉緩衝液100mL中,過濾除菌,加入300mL滅菌蛋白腖水中混勻,分裝試管,每管約2mL~3mL。避光保存,如變黃應棄去。
  接種後培養液變黃為陽性。
A11  Andrade氏糖類肉湯和指示劑
基礎液:
牛肉浸膏                   3.0g
蛋白腖                     10.0g
氯化鈉                     10.0g
蒸餾水                     1 000mL
調節pH值(7.2±0.2)。在121℃高壓滅菌15min。
Andrade氏指示劑:
酸性品紅                   0.2g
蒸餾水                     100.0g
1mol/L氫氧化鈉             16.0mL
使用前要脫色。如果需要加1mL~2mL氫氧化鈉溶液,加10mL指示劑到1L基礎液中。
糖儲備液:
用葡萄糖、乳糖、蔗糖和甘露糖配製10%溶液。用衛矛醇、水楊素和其他糖類配製5%溶液。通過0.20μm濾膜過濾除菌。用基礎液按1:10稀釋糖溶液,加Andrade氏指示劑至所需濃度,混合。
A12  氧化酶試劑
    溶解1.0g二鹽酸四甲基對苯二胺於盛有100mL水的暗色玻璃瓶中,冰箱內存放不超過7天,勿需高壓滅菌。陽性培養物在1min內產生黑紫色斑點。
A13  粘絲試驗溶液
     溶解0.5g去氧膽酸鈉於100mL水中,擰緊瓶蓋保存於冰箱中。勿需高壓滅菌。
     霍亂弧菌在該溶液中被乳化後,1min內形成粘液樣團塊。當粘塊從玻片上被拉出2cm~3cm時成粘絲。   
   
   
   

 

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