8 大腸菌群固體培養基測定法
8.1 樣品製備同第4章。
8.2 計數
8.2.1 選取適宜的三個連續稀釋度的樣品液,每個稀釋度接種兩個滅菌平皿,每皿1mL。另取1mL稀釋劑加入一個滅菌平皿中,作空白對照。
8.2.2 將冷至45±0.5℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)10～15mL傾注於每個平皿中。小心旋轉平皿,將培養基與樣液充分混勻。
8.2.3 待瓊脂凝固後,再加3～4mL VRBA覆蓋平板表層。
8.2.4 翻轉平板,置於36±1℃培養18～24h。
8.2.5 選用有30～150個菌落的平板,計數平板上出現的典型大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色,菌落周圍有紅色的膽鹽沉澱環。菌落直徑為0.5mm或更大。
8.2.6 證實
8.2.6.1 從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落,移種於BGLB肉湯管內, 36±1℃培養24h和48h,觀察產氣情況。
8.2.6.2 將出現產氣的肉湯管判為大腸菌群陽性。對形成菌膜的陽性管,應進行革蘭氏染色,以便排除革蘭氏陽性杆菌。
8.2.7 結果報告：經最後證實為陽性(產氣,革蘭氏陰性杆菌) 的試管百分比乘以於8.2.5條中計數的平板菌落數,再乘以稀釋倍數,即為每克(毫升)樣品中大腸菌群數。
例：10**-4樣品稀釋液1mL,在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落,挑取其中10個接種BGLB肉湯管,證實有6個陽性管,則該樣品的大腸菌群數為：100×6/10×10**-4/g(mL)＝6.0×10**5/g(mL)
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