微生物生長量的測定

                          微生物生長量的測定
    既然生長意味著原生質含量的增加，所以測定生長的方法也部直接地以此為根據，而測定繁殖則都要建立在計數這一基礎上。
    （一）稀釋平板菌落計數法
    是一種最常用的活菌汁數法。取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在其凝固前均勻混合，或塗布於已凝固的固體培養基平板上．在最話條件下培養後，從平板上出現的菌落數乘上菌液的稀釋度，即可計算出原菌液的含菌數。在一個9cm直徑的培養皿平板上．一般以出現50~500個菌落為宜。
    這種方法在操作時，有較高的技術要求。其中最重要的是應使樣品充分混勻，井讓每支栘液管隻能接觸一個稀釋度的菌液，有人認為，對原西液濃度為10的9個/mL的微生物來說，如果第一次稀釋即采用10的-4級，第二次采用10的-2級，然後再吸此菌液o．2mL進行表麵凃布和菌落計數，則所得的結果最為精確。其主要原因是，一般的吸管壁常因存在油脂而影響計數的精確度（有時誤差競高達15%）。這一稀釋過程的示意圖詳見實驗技術。
    (二）血球計數板法
    血球汁數板法是用來測定一定容積中的細胞總數目的常規方法。這種方法的特點是測定簡便、直接．快速，但測定的對象有一定的局限性，隻適合於個體較大的微生物種類，如
酵母菌．黴菌的孢子等。此外測定結果是微生物個體的總數．其中包括死亡的個體和存活的個體．要想測定活菌的個數．還必須借助其他方法配合。
   （三）稱幹重
    稱幹重可用離心法或過濾法測定，一般幹重為濕重的10%一2%。在離心法中，將待測培養液放人離心管中．用清水離心洗滌1—5次後．進行幹燥。幹燥溫度可采用105、100℃或紅外線烘幹．也可在較低的溫度（80℃或40℃）下進行真空幹燥．然後稱幹重。以
細菌為例，一個細胞一般重約10的-12~10的-13g。
    另一種方法為過濾法。絲狀真菌可用濾紙過濾．而細菌則可用醋酸纖維膜等濾噴進行過濾。過濾後，細胞可用少量水洗滌。然後在40℃下真空幹燥，稱幹重；以大腸杆菌為例，在液體培養物中，細胞的濃度可達2*10的8個/mL。100ml培養物可得10一90mg幹重的
細胞。
    這種方法較適合於絲狀微生物的生長量的測定，對於細菌來說，一般在實監室或生產實踐中較少使用。
    （四）比濁法
    細菌培養物在其生長過程中，由於原生質含量的增加，會引起培養物混濁度的增高．最古老的比濁法是采用MoFarland比濁管。這是用不同濃度的BaCl2與稀H2SO4配製成的10支試管，其中形成的BaSO4有10個梯度，分別代表10個相對的細菌濃度(預先用相應的細菌測定）。某一未知濃度的菌液隻要在透射光下用肉眼與某一比濁管進行比較，如果兩者透光度相當。即可目測出該菌液的大致濃度。
    如果要做精確測定，則可用分光光度計進行。在可見光的450~650nm波段內均可測定。為了對某一培養物內的菌體生長做定時跟蹤，可采用不必取樣的側壁三角燒瓶來進行。測定時，隻要把瓶內的培養液倒入側臂管中．然後將此管插入特製的光電比色計比色座孔中．即可隨時測出生長情況，而不必取用菌液。
    以上介紹了若幹測定微生物的生長量或計算繁殖數的主要方法．其中，最常用的為稱幹
重．測濁度用分光光度計，用計數板測總菌數以及用平板菌落計數法測活菌數等方法。必須指出的是，不管用什麽方法，鄙有其優缺點和使用範圍。所以，在使用前，一定要根據自己的研究對象和研究目的的不同，選用最合適的方法。
  
   

 

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