6.14 氰化鉀培養基(KCN)
6.14.1製備
蛋白腖 10.0g
氯化鈉 5.0g
磷酸二氫鉀 0.225g
磷酸氫二鈉 5.64g
硝酸鉀(無亞硝酸鹽) 1.0g
5g/L氰化鉀溶液 10.0mL
蒸餾水 1000.0mL
將蛋白腖、氯化鈉和硝酸鉀加入 900mL蒸餾水中,攪拌均勻,靜置約10 min,加熱煮沸至完全溶解,調至pH7.6±0.1,高壓滅菌121℃,15min,取出置於4℃冰箱內進行冷卻。
將磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉溶於100 mL蒸餾水,高壓滅菌121℃,15min,取出進行冷卻。
在冷卻後的上述培養液900mL中,以無菌操作加入磷酸鹽緩衝液100mL和5g/L氰化鉀溶液(必須用冷卻的滅菌蒸餾水配製)10mL,搖混均勻(氰化鉀的最終濃度為0.05 g/L)。並立即分裝滅菌試管(12 mm×100mm),每管約1～1.5mL,同時加入約0.3mL滅菌石蠟油封蓋。在4℃冰箱中可保存7d。
6.14.2 試驗與判斷
6.14.2.1製試劑
甲液：
氨基苯磺酸 0.8g
5 mol/L乙酸 100.0mL
乙液：
α-萘胺 0.5g
5 mol/L乙酸 100.0mL
6.14.2.2試驗
在三糖鐵瓊脂斜麵上挑取少量菌苔,先接種於吲哚培養基中,混勻(使其濃度近似於 37℃,24h肉湯培養物)然後燒灼接種環,再沾取吲哚培養基少許接種於氰化鉀培養基中, 於37℃培養24±2h。培養之後,先觀察培養液有無混濁,然後在每支氰化鉀培養物試管內滴加甲液1滴,然後再滴加乙液1滴,搖勻。
6.14.2.3判斷
強陽性反應為鮮紅色,弱陽性為粉紅色,在30～60 min內,強陽性可轉為暗褐色。陰性無變化(加試劑前,培養液出現混濁,即有細菌生長,亦為陽性反應)。
6.15 丙二酸鈉培養基(M)
酵母膏 1.0g
硫酸銨 2.0g
磷酸氫二鉀 0.6g
磷酸二氫鉀 0.4g
氯化鈉 2.0g
丙二酸鈉 3.0g
葡萄糖 0.25g
溴麝香草酚藍 0.025g或5g/L溶液5 mL
蒸餾水 1000.0mL
除溴麝香草酚藍外,將其他成分加入蒸餾水中攪拌均勻,靜置約10 min,加熱煮沸至完全溶解,調至pH6.9±0.1,加入溴麝香草酚藍,再混勻,分裝試管(12mm×100mm), 每管1～1.5mL,高壓滅菌115℃,10min。
試驗與判斷：
接種大量幼嫩待試菌,於37℃培養24±2h,陽性反應為普藍色；陰性不變色。
6.16 衛矛醇半固體瓊脂(D)
蛋白腖 2.0g
酵母膏 1.0g
衛矛醇 10.0g
氯化鈉 5.0g
磷酸氫二鉀 0.3g
溴麝香草酚籃 0.08g或8g/L溶液10mL
瓊 脂 2.5g
蒸餾水 1000.0mL
除溴麝香草酚藍外,將其他成分加入蒸餾水中,攪拌均勻,靜置約10 min,加熱煮沸至完全溶解,調至pH7.1±0.1,加入溴麝香草酚籃,呈綠色,分裝試管(12mm×100mm), in,滅菌後立即取出,冷卻備用。
試驗與判斷：
穿刺接種待試菌,於37℃培養24±2h,陽性反應為黃色陰性不變色。
注：新製備的培養基均應用已知陽性及陰性菌進行測試,以保證培養基質量。每管約1～1.5mL,高壓滅菌121℃,15m
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