一、基本原理
平板培養基含有細菌生長所需要的營養成分，當取自不同來源的樣品接種於培養基上，在37℃溫度下培養，1—2天內每一菌體即能通過很多次細胞分裂而進行繁殖，形成一個可見的細胞群體的集落，稱為菌落。每一種細菌所形成的菌落都有它自己的特點，例如菌落的大小，表麵幹燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質地疏鬆或緊密等。因此，可通過平板培養來檢查環境中細菌的數量和類型。
二、器材
肉膏蛋白腖瓊脂平板，無菌水，滅菌棉簽（裝在試管內），接種環，試管架，酒精燈或煤氣燈，記號筆（或蠟筆），廢物缸。
三、操作步驟
每組在“實驗室”和“人體”兩大部分中各選擇一個內容做實驗，或由教師指定分配，最後結果供全班討論。
1．寫標簽
任何一個實驗，在動手操作前均需首先將器皿用記號筆做上記號，培養皿的記號一般寫在皿底上。如果寫在皿蓋上，同時觀察兩個以上培養皿的結果，打開皿蓋時，容易混淆。用記號筆寫上班級、姓名、日期，本次實驗還要寫上樣品來源（如實驗室空氣或無菌室空氣或頭發等），字盡量小些，寫在皿底的一邊，不要寫在當中，以免影響觀察結果。
2．實驗室細菌檢查
（1）空氣 將一個肉膏蛋白腖瓊脂平板放在當時做實驗的實驗室，移去皿蓋，使瓊脂培養基表麵暴露在空氣中；將另一肉膏蛋白腖瓊脂平板放在無菌室或無人走動的其他實驗室，移去皿蓋。一小時後蓋上兩個皿蓋。
（2）實驗台和門的旋鈕
（a）用記號筆在皿底外麵中央畫一直線，再在此線中間處畫一垂直線，如圖Ⅱ-1。
（b）取棉簽 左手拿含有棉簽的試管，在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無名指夾持棉塞（或試管帽），將其取出（圖Ⅱ-2，B），將管口很快地通過煤氣燈（或酒精燈）的火焰，燒灼管口；輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出（圖Ⅱ-2，C）。放回棉塞（或試管帽）（圖Ⅱ-2，D），並將空試管放在試管架上。
（c）弄濕棉簽 左手取滅菌水試管，如上法拔出棉塞（或試管帽）並燒灼管口，將棉簽插入水中，再提出水麵，在管壁上擠壓一下以除去過多的水分，小心將棉簽取出，燒灼管口，放回棉塞（或試管帽），並將滅菌水試管放在試管架上。
（d）取樣 將濕棉簽在實驗台麵或門旋鈕上擦拭約2平方厘米的範圍。
（e）接種 按圖Ⅱ-3，A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫。再將棉簽伸入，在瓊脂表麵頂端接種（滾動一下）（圖Ⅱ-3，B），立即閉合皿蓋。並按圖Ⅱ-2，E和F，將原放棉簽的空試管拔出棉塞（或試管帽），燒灼管口，插入用過的棉簽，將試管放回試管架。
（f）劃線 另取接種環在火焰上滅菌，如圖Ⅱ-4，先將環端燒熱（圖Ⅱ-4，1），然後將接種環提起垂直放在火焰上，以使火焰接觸金屬絲的範圍廣一些，待接種環燒紅，再將接種環斜放，沿環向上，燒至可能碰到培養皿的部分，再移向環端，如此很快地來回通過火焰數次。
左手拿起平板，同樣開啟一縫，將滅過菌並冷卻了的接種環（可在瓊脂表麵邊緣空白處試溫度，若發出濺潑聲，表示太燙），通過瓊脂頂端的接種區，向下劃線，直到平板的一半處（圖Ⅱ-3，C）。注意：接種環與瓊脂表麵的角度要小，移動的壓力不能太大，否則會刺破瓊脂。
閉合皿蓋，左手將平板向左轉動至空白處，右手拿的接種環再在火焰上燒灼，使冷。接種環通過前麵劃的線條再在瓊脂的另一半，按圖Ⅱ-3，D從上向下來回劃線至1／2處。
燒灼接種環，轉動平板，按圖Ⅱ-3，E，劃最後1／4，立刻蓋上皿蓋，燒灼接種環，放回原處。
整個劃線操作均要求無菌操作，即靠近火焰，而且動作要快。
3．人體細菌的檢查
（1）手指（洗手前與洗手後）
（a）分別在兩個瓊脂平板上標明洗手前與洗手後（當然，班級、姓名、日期各項在每次寫標簽時是必不可少的）。
（b）移去皿蓋，將未洗過的手指在瓊脂平板的表麵，輕輕地來回劃線，蓋上皿蓋。
（c）用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中衝洗幹淨，幹燥後，在另一瓊脂平板表麵來回移動，蓋上皿蓋。
（2）頭發 在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方，用手將頭發用力搖動數次，使細菌降落到瓊脂平板表麵，然後蓋上皿蓋。
（3）咳嗽 將去蓋瓊脂平板放在離口約6—8cm處，對著瓊脂表麵用力咳嗽，然後蓋上皿蓋。
（4）鼻腔
（a）按照實驗台檢查法的步驟（b）和（c），取出棉簽，並將其弄濕。
（b）用濕棉簽在鼻腔內滾動數次。
（c）按實驗台檢查法的步驟（e）和（f），接種與劃線，然後蓋上皿蓋。
4．將所有的瓊脂平板翻轉，使皿底在上，放37℃培養箱，培養1—2天。
5．結果記錄方法
（1）菌落計數在劃線的平板上，如果菌落很多而重疊，則數平板最後1/4麵積內的菌落數。不是劃線的平板，也一分為四，數1/4麵積的菌落數。
（2）根據菌落大小、形狀、高度、幹濕等特征觀察不同的菌落類型。但要注意，如果細菌數量太多，會使很多菌落生長在一起，或者限製了菌落生長而變得很小，因而外觀不典型，故觀察菌落的特點時，要選擇分離得很開的單個菌落。
菌落特征描寫方法如下：
（a）大小 大、中、小、針尖狀。可先將整個平板上的菌落粗略觀察一下，再決定大、中、小的標準，或由教師指出一個大小範圍。
（b）顏色 黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。
（c）幹濕情況 幹燥、濕潤、粘稠。
（d）形態 圓形、不規則等。（e）高度扁平、隆起、凹下。
（f）透明程度 透明、半透明、不透明。
（g）邊緣 整齊、不整齊。
五、實驗報告
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