一、基本原理
芽孢染色法是利用細菌的芽孢和菌體對染料的親合力不同的原理，用不同染料進行著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便於區別。芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難，因此，當先用一弱堿性染料，如孔雀綠（malachite green）或堿性品紅（basicfuchsin）在加熱條件下進行染色時，此染料不僅可以進入菌體，而且也可以進入芽孢，進入菌體的染料可經水洗脫色，而進入芽孢的染料則難以透出，若再用複染液（如番紅液）或襯托溶液（如黑色素溶液）處理，則菌體和芽孢易於區分。
二、器材
枯草芽孢杆菌，蠟狀芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）；
孔雀綠染液，番紅水溶液，苯酚品紅溶液，黑色素溶液等。
三、操作步驟
方法1、
（1）將培養24小時左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作塗片、幹燥、固定。
（2）滴加3—5滴孔雀綠染液於已固定的塗片上。
（3）用木夾夾住載玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但勿沸騰，切忌使染液蒸幹，必要時可添加少許染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約4—5分鍾。這一步也可不加熱，改用飽和的孔雀綠水溶液（約7．6％）染10分鍾。
（4）傾去染液，待玻片冷卻後水洗至孔雀綠不再褪色為止。
（5）用番紅水溶液複染1分鍾，水洗。
（6）待幹燥後，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。
方法2、
（1）取二支潔淨的小試管，分別加入0．2ml無菌水，再往一管中加入1—2接種環的蠟狀芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接種環的生孢梭菌的菌苔，兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。
（2）在菌懸液中分別加入0．2ml苯酚品紅溶液，充分混合後，於沸水浴中加熱3—5分鍾。
（3）用接種環分別取上述混合液2—3環於兩片載玻片上，塗薄，風幹後，將載玻片稍傾斜於燒杯上，用95％乙醇衝洗至無紅色液流出。
（4）再用自來水衝洗，濾紙吸幹。
（5）取1—2接種環黑色素溶液於塗片處，立即展開塗薄，自然幹燥後，油鏡觀察，在淡紫灰色背景的襯托下，菌體為白色，菌體內的芽孢為紅色。
四、實驗報告
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