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實驗十四 酵母菌的形態觀察及死、活細胞的鑒別



錄入時間:2009-1-5 14:40:13 來源:青島betway必威西汉姆联生物

一、基本原理
  酵母菌是多形的、不運動的單細胞微生物,細胞核與細胞質已有明顯的分化,菌體比細菌大。繁殖方式也較複雜,無性繁殖主要是出芽生殖,僅裂殖酵母屬是以分裂方式繁殖;有性繁殖是通過接合產生子囊孢子。本實驗通過用美藍染色製成水浸片,和水-碘水浸片來觀察生活的酵母形態和出芽生殖方式。美藍是一種無毒性染料,它的氧化型是藍色的,而還原型是無色的,用它來對酵母的活細胞進行染色,由於細胞中新陳代謝的作用,使細胞內具有較強的還原能力,能使美藍從藍色的氧化型變為無色的還原型,所以酵母的活細胞無色,而對於死細胞或代謝緩慢的老細胞,則因它們無此還原能力或還原能力極弱,而被美藍染成藍色或淡藍色。因此,用美藍水浸片不僅可觀察酵母的形態,還可以區分死、活細胞。但美藍的濃度、作用時間等均有影響,應加注意。
二、器材
  釀酒酵母或卡爾酵母(Saccharomyces calsbergensis);
  0.05%、0.1%呂氏堿性美藍染液,革蘭氏染色用的碘液;
  顯微鏡,載玻片,蓋玻片等。
三、操作步驟
1.美藍浸片觀察
(1)在載玻片中央加一滴0.1%呂氏堿性美藍染液,液滴不可過多或過少,以免蓋上蓋玻片時,溢出或留有氣泡。然後按無菌操作法取在豆芽汁瓊脂斜麵上培養48小時的釀酒酵母少許,放在呂氏堿性美藍染液中,使菌體與染液均勻混合。
(2)用鑷子夾蓋玻片一塊,小心地蓋在液滴上。蓋片時應注意,不能將蓋玻片平放下去,應先將蓋玻片的一邊與液滴接觸,然後將整個蓋玻片慢慢放下,這樣可以避免產生氣泡。
(3)將製好的水浸片放置3分鍾後鏡檢。先用低倍鏡觀察,然後換用高倍鏡觀察釀酒酵母的形態和出芽情況,同時可以根據是否染上顏色來區別死、活細胞。
(4)染色半小時後,再觀察一下死細胞數是否增加。
(5)用0.05%呂氏堿性美藍染液重複上述的操作。
2.水-碘浸片觀察
  在載玻片中央滴一滴革蘭氏染色用的碘濃,然後再在其上加三滴水,取釀酒酵母少許,放在水-碘液滴中,使菌體與溶液混勻,蓋上蓋玻片後鏡檢。
四、實驗報告   
   

 

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