7.1檢樣稀釋
7.1.1以無菌操作將檢樣259 (mL)放於含有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內預置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8 000r/min~10000r/min的速度處理1min,做成l:10的均勻稀釋液。
7.1.2用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注人含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
7.1.3另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做l0倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管.
7.1.4根據食品衛生標準要求或對檢樣汙染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種三管。
7.2乳糖發酵試驗將待檢樣品接種於乳糖膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發醉管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種三管,置36℃ 士1℃ 溫箱內,培養24h士2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
7.3分離培養將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36℃ 土1℃ 溫箱內,培養18h~24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
7.4證實試驗在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1個一2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置36℃ 士1℃ 培養箱內培養24h士2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞杆菌,即可報告為大腸菌群陽性。
7.5報告根據證實為大腸菌群陽性的管數,煮MPN檢索表.報告每100mL (g)大腸菌群的MPN值。
8糞大腸菌群(Faecal coli介朋)
8.1用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見7.2)轉種於EC肉湯管內,置“44.5℃ 士0.2℃ 水浴箱內(水浴箱內的水麵應高於EC肉湯液麵),培養24h士2h,經培養後,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置培養18h-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
8.2結果報告根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。
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