1.範圍本標準規定了食品中致瀉大腸埃希氏菌的檢驗方法。本標準適用於食品和食物中毒樣品中致鴻大腸埃希氏菌的檢驗。
2.規範性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款.凡是注日期的引用文件,其隨後所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用於本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用於本標準.
3.設備和材料
3.1冰箱:O℃——4℃。
3.2恒溫培養箱:36℃士1℃,42℃。
3.3恒溫水浴鍋:100℃,65℃——68℃,50℃。
3.4顯微鏡:10*——100*。
3.5離心機:3OO0r/min。
3.6酶標儀。
3.7均質器或滅菌乳缽。
3.8架盤藥物天平:0g——500g,精確至0.5g。
3.9細菌濃度比濁管:MacFarland3號。
3.10滅菌廣口瓶:500mL。
3.11滅菌錐形瓶:500mL,250mL。
3.12滅菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、5ml(具0.1mL刻度)。
3.13滅菌培養皿;直徑90mm.
3.14滅菌試管:10mm*75mm、16mm*160mm。
3.15注射器:0.25mL,連接內徑為1mm塑料小管一段。
3.16滅菌的刀子、剪子、鑷子等.
3.17小白鼠:1日~4日齡。
3.18硝酸纖維素濾膜150mm*50mm,Φ0.45mm。臨用時切成兩張,每張75mm*50mm,用鉛筆劃格,每格6mm*6mm,每行10格,分6行。滅菌備用。
4.培養基和試劑
4.1乳糖膽鹽發酵管:按GB/T4789.28一2003中4.9規定。
4.2營養肉湯:按GB/T4789.28一2003中4.8規定。
4.3腸道菌增菌肉湯:按GB/T4789.28一2003中4.18規定。
4.4麥康凱瓊脂:按GB/T落789.28一2003中4.24規定。
4.5伊紅美藍瓊脂(EMB):按GB/T4789.28一2003中4.25規定。
4.6三糖鐵瓊脂(TSI):按GB/T4789.28一2003中4.26,4.27規定。
4.7克氏雙糖鐵瓊脂(KI):按GB/T4789.28一2003中4.28,429規定。
4.8糖發酵管(乳糖、鼠李糖、木糖和甘露醇):按GB/T4789.28一2003中3.2規定。
4.9賴氨酸脫梭酶試驗培養基:按GB/T478928一2003中3.12規定。
4.10尿素瓊脂(pH72):按GB/T4789.28一2003中3.1蘇規定。
4.11氰化鉀(KC拜)培養基:按GB/T4789.28一2003中3.16規定。
4.12蛋白陳水、靛基質試劑:按GB/T4789.28一2003中3.13規定。
4.13半固體瓊脂:按GB/T478928一2003中4.30規定。
4.14Honda氏產毒肉湯:按GB/T4789.28一2003中4.34規定。
4.15Elek氏培養基:按GB/T4789.28一2003中4.35規定。
4.16氧化酶試劑;按GB/T478928一2003中3.18規定。
4.17革蘭氏染色液:按GB/T4789.28一2003中2.2規定.
4.18致病性大腸埃希氏菌診斷血清、侵襲性大腸埃希氏菌診斷血清、產腸毒素大腸埃希氏菌診斷血清、出血性大腸埃希氏菌診斷血清。
4.19產腸毒素大腸埃希氏菌LT和ST酶標診斷試劑盒。
4.20產腸毒素LT和ST大腸埃希氏菌標準菌株。
4.21抗LT抗毒素。
4.22多粘菌素B紙片:300IU,Φ16mm。
4.23 0.1%硫柳汞榕液。
4.24 2%伊文思藍溶液。
5.檢驗程序:致瀉大腸埃希氏菌檢驗程序見圖1(略)。
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