6操作步驟
6.1樣品處理按無菌操作稱取食品檢樣25g(ml),加人225mL滅菌生理鹽水,研成勻漿製成混懸液。
6.2培養將上述混懸液吸取5ml,接種於50ml工葡萄糖肉浸液肉湯,或直接劃線接種於血平板。如檢樣汙染嚴重,可同時按上述量接種匹克氏肉湯,經36℃ 土l℃ 培養24h接種血平板,置36℃ 士1℃ 培養24h,挑起乙型血圓形突起的細小菌落,在血平板上分純,然後觀察溶血情況及革蘭氏染色,並進行鏈激酶試驗及杆菌膚敏感試驗。
6.3形態與染色本菌裏球形或卵圓形,直徑0.5um ——1um鏈排列,鏈長短不一,頰者4個~8個細胞組成,長者20個一30個,鏈的長短常與細菌的種類及生長環境有關;液體培養中易呈長鏈;在固體培養基中常呈短鏈,不形成芽抱,無鞭毛,不能運動。
6.4培養特性該菌營養要求較高,在普通培養纂上生長不良,在加有血液、血清培養荃中生長較好。溶血性鏈球菌在血清肉湯中生長時管底呈絮狀或顆粒狀沉澱。血平板上菌落為灰白色,半透明或不透明,表麵光滑,有乳光,直徑約0.5mm~0.75mm,為圓形突起的細小菌落,乙型溶血鏈球菌周圍有2mm—4mm。界限分明、無色透明的溶血圈。
6.5鏈激酶試驗致病性乙型溶血性鏈球菌能產生鏈激酶(即溶纖維蛋白酶),此酶能激活正常人體血液中的血漿蛋白酶原,使成血漿蛋白酶,而後溶解纖維蛋白。吸取草酸鉀血漿0.2ml,加0.8ml滅菌生理鹽水,混勻,再加人18h~24卜、36℃ 士1℃ 培的鏈球菌培養物0.5 m及0.25%氯化鈣0.25ml(如氯化鈣已潮解,可適當加大至0.3%——0.35 %)振蕩搖勻,置於36℃ 士1℃ 水中10min,血漿混合物自行凝固(凝固程度至試管倒置,內容物不流動),然後觀察凝固塊重新完全溶解的時間,完全溶解為陽性,如24h後不溶解即為陰性。
草酸鉀人血漿配製:草酸鉀0.01g放人滅菌小試管中,再加人5ml血,混勻,經離心沉澱,吸取上清液即為草酸鉀人血漿。6.6杆菌肚敏感試驗挑取乙型溶血性鏈球菌液,塗布子血平板上,用滅菌鑷子夾取每片含有。.04單位的杆菌膚紙片,放於上述平板上,於36℃ 士1℃ 培養18h—24h,如有抑菌帶出現即為陽性,同時用已知陽性菌株作為對照。
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