6、操作步驟
6.1菌數測定以無菌操作將檢樣25g（mL)，用滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩衝液做成10（-1）——10（-5）的稀釋液按GB/T4789.2測定。取各稀釋液0.1mL，接種在兩個選擇性培養基一甘露醉卵黃多粘菌素（MYP）瓊脂培養基上，用L形棒塗布於整個表麵，置36℃士1℃培養12h——20h，選取適當菌落數的平板進行計數，蠟樣芽胞杆菌在此培養基上的菌落為粉紅色（表示不發酵甘露醇）周圍有粉紅色的暈（表示產生卵磷脂酶）。計數後，從中挑取五個此種菌落做證實試驗，根據證實的蠟樣芽胞杆菌的菌落數計算出該平板上的菌落數，然後乘其稀釋倍數，即得每克（毫升）樣品中所含蠟樣芽胞杆菌數。例如：將0.1ml 10（-4）樣品稀釋液塗布於MYP平板上，其可疑菌落為25個，取五個鑒定，證實四個菌落為蠟樣芽胞杆菌，則1g(mL）檢樣中所含蠟樣芽胞杆菌數為：25*（4/5）*100000=20000006.2分離培養取檢樣或稀釋液劃線分離於選擇性培養基（MYP）上，置37℃培養12h～20h，挑取可疑的蠟樣芽胞杆菌菌落（見6.1）接種於肉湯和營養瓊脂做成純培養，然後做證實試驗
6.3證實試驗
6.3.1形態觀察本菌為革蘭氏陽性大杆菌，寬度在1um或1um以上，芽胞壘卵圓形，不突出菌體，多位於菌體中央或稍偏子一端．6.3.2培養特性本菌在肉湯中生長混濁，常微有菌膜或壁環，振搖易乳化；在普通瓊脂平板上其菌落不透明、表麵粗糙、似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣不整齊。
6.3.3生化性狀及生化分型
6.3.3.1生化性狀本菌有動力；能產生卵磷脂酶和酩蛋白酶；過氧氫酶試驗陽性；溶血；不發酵甘露醇和木糖；常能液化明膠和使硝酸鹽還原。在厭氧條件下能發酵葡萄糖。
6.3.3.2生化分型根據蠟樣芽胞杆菌對檸檬酸鹽利用、硝酸鹽還原、澱粉水解、V-P反應、明膠液化性狀的試驗，分成不同型別。
6.3.4與類似菌鑒別
本菌在生化性狀上與蘇雲菌芽胞杆菌極為相似．但後者可籍細胞內產生蛋白質毒素結晶加以鑒別。其檢查方法如下：取營養瓊脂上純培養物少許，加少量蒸餾水塗於玻片上，待自然千燥後用弱火焰固定，加甲醉於玻片上，半分鍾後傾去甲醇，置火焰上幹燥，然後滴加0.5％堿性複紅液，並用酒精燈加熱至微見蒸氣維持1.5min，移去酒精燈，將玻片放置半分鍾，傾去染液，置潔淨自來水充分漂洗、晾幹、鏡檢。在油浸鏡下檢查有無遊離芽胞和深染的似菱形的紅色結晶小體（如未形成遊離穿胞，培養物應放室溫再保存ld—2d後檢查），如有即為蘇雲金芽胞杆菌，蠟樣芽胞杆菌檢查為陰性。
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