羊膜腔感染綜合征（IAIS）是導致圍產兒病率、死亡率和產婦病率、死亡率升高的重要原因。引起IAIS的病原微生物很複雜,E.coli是最常見的需氧菌之一。本研究建立了晚孕SD大鼠E.coli宮內感染模型,通過母體靜脈和羊膜腔內給予頭孢曲鬆鈉,比較兩者胎盤組織IL26和MMP29的表達水平,探討羊膜腔內給藥對IAIS的治療作用。
1 材料與方法
1.1 資料
所有動物由重慶醫科大學實驗動物中心提供。選擇SPF級孕15dSD雌鼠36隻,體質量300±10g,清潔喂養。取大腸埃希菌E.coli標準菌株ATCC25922菌株接種於LB平板上,37℃培養16～18h,挑取單個菌落接種於LB培養液中,37℃,60r/min細菌搖床過夜稀釋至10（10）/L後使用。實驗使用注射用頭孢曲鬆鈉山東魯抗醫藥股份有限公司,批號C060611,1.0g/支。IL26、MMP29多克隆抗體於美國SantaCruz購進。
1.2 方法
1.2.1實驗動物分組及處理：36隻孕鼠完全隨機分為4組,每組9隻,根據國內外的報道並結合實驗需要,所有孕鼠於妊娠第15天一側宮角兩胎囊間隙接種10（10）/L大腸埃希菌菌液0.2ml,成功建立了接種後1d的SD大鼠宮內感染模型,胎盤組織病理學檢查顯示炎症表現,羊水離心沉澱LB培養基劃線培養陽性圖1、2,各接種孕鼠在3d內無早產發生。於妊娠第16天給藥,羊膜腔內給藥組各孕鼠開腹行接種側各胎囊穿刺,以無菌注射器回抽見羊水確認穿刺針進入羊膜腔內後各胎囊注射20mg/ml頭孢曲鬆鈉生理鹽水溶液2mg/胎,以同法給予羊膜腔內對照組各孕鼠接種側各胎囊生理鹽水0.1ml後關腹。尾靜脈給藥組各孕鼠尾靜脈注射100mg/ml頭孢曲鬆鈉生理鹽水溶液60mg/隻,尾靜脈對照組各孕鼠同法給予生理鹽水0.6ml。所有孕鼠接種、穿刺、給藥、采集標本均采用無菌術,術前、術後清潔喂養,無飲食控製,在給藥後連續3d內均無早產發生。分別於給藥後1、2、3d,每天每組隨機處死3隻取材。
1.2.2 標本采集：斷頭處死孕鼠,隨機抽取接種側宮角頂端三個胎囊之一的胎盤胎膜組織分別置於4%多聚甲醛液固定後,經脫水、透明、浸蠟、包埋後切片。
1.2.3 指標觀察：每張胎盤組織切片用S2P法行免疫組織化學染色,在高倍鏡10×40下隨機選擇5個染色適中的視野進行拍照,所有圖片應用Image2ProPlus5.0型病理影像多媒體圖文操作係統測其陽性反應部位的平均光密度值,進行蛋白表達半定量分析。
1.3 統計學方法
結果以x±s表示,采用SPSS13.0統計軟件進行方差分析和q檢驗。
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