酵母菌是一些單細胞真菌。酵母可以通過出芽進行無性生殖,也可以通過形成子囊孢子進行有性生殖。無性生殖即在環境條件適合時,從母細胞上長出一個芽,逐漸長到成熟大小後與母體分離。在營養狀況不好時,一些可進行有性生殖的酵母會形成孢子,在條件適合時再萌發。
培養酵母最適pH 值為pH4.5-5.0。最適生長溫度一般在28℃~30℃之間。
釀酒酵母,用到的培養基有:
1、酵母完全培養基YPD:酵母提取物10g,蛋白陳20g,葡萄糖20g,定容至1L。加入1.5%瓊脂粉則成為固定培養基。
2、SC(合成完全培養基)培養基(用於篩選酵母轉化子):YNB(不含氨基酸的酵母氮源) 6.7g,葡萄糖20g,加入相應的氨基酸,定容至1L。加入1.5%瓊脂粉則成為固定培養基。
由於葡萄糖和氨基酸,滅菌是用115度,30min的滅菌條件。
液體搖菌時一般在30度下搖24-30min,就可以,固體培養一般在30度下要3-5天。
酵母破壁的液氮研磨方法的詳細步驟:
取1L酵母,誘導完後,離心(centrifugation)收菌體,稱濕重,用蛋白(protein)純化buffer懸浮菌體,重量(g):buffer體積(毫升)=1:1--1:2。用注射器將菌液加入液氮中,控製加入速度,使得菌液進入液氮中後形成小顆粒,太快容易結成塊。將菌體液氮顆粒轉入高速打碎器(用的是打碎草藥的機器,RMB600)中,注意不要將多餘液氮倒入,大約2-3萬轉/分破碎1分鍾,菌體顆粒應該成粉末狀。倒出粉末,37度水浴融化後,再用注射器加入液氮中,重複上述步驟,重複3次。高速(20000rpm,4度30分)離心(centrifugation)收上清,如上清雜質較多,需要多離幾遍,上清中目標蛋白(protein)純化同E.coli.
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