(一)實驗原理 細菌是否具有鞭毛是細菌分類鑒定的重要特征之一。采用鞭毛染色法雖能觀察到鞭毛的形態、著生位置和數目,但此法既費時又麻煩。如果僅須了解某菌是否有鞭毛,可采用懸滴法或水封片法(即壓滴法)直接在光學顯微鏡下檢查活細菌是否具有運動能力,以此來判斷細菌是否有鞭毛。此法較快速、簡便。
懸滴法就是將菌液滴加在潔淨的蓋玻片中央,在其周邊塗上凡士林,然後將它倒蓋在有凹槽的載玻片中央,即可放置在普通光學顯微鏡下觀察。水封片法是將菌液滴在普通的載玻片上,然後蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察。
大多數球菌不生鞭毛,杆菌中有的有鞭毛有的無鞭毛,弧菌和螺菌幾乎都有鞭毛。有鞭毛的細菌在幼齡時具有較強的運動力,衰老的細胞鞭毛易脫落,故觀察時宜選用幼齡菌體。
1.製備菌液:在幼齡菌斜麵上,滴加3-4mL無菌水,製成輕度混濁的菌懸液。
2.塗凡士林:取潔淨無油的蓋玻片1塊,在其四周塗少量的凡士林。
3.滴加菌液:加1滴菌液於蓋玻片的中央,並用記號筆在菌液的邊緣做一記號,以便在顯微鏡觀察時,易於尋找菌液的位置。
4.蓋凹玻片 將凹玻片的凹槽對準蓋玻片中央的菌液,並輕輕地蓋在蓋玻片上,使兩者粘在一起,然後翻轉凹玻片,使菌液正好懸在凹槽的中央,再用鉛筆或火柴棒輕壓蓋玻片,使玻片四周邊緣閉合,以防菌液幹燥。
若製水封片,在載玻片上滴加一滴菌液,蓋上蓋玻片後即可置顯微鏡下觀察。
5.鏡檢 先用低倍鏡找到標記,再稍微移動凹玻片即可找到菌滴的邊緣,然後將菌液移到視野中央換高倍鏡觀察。由於菌體是透明的,鏡檢時可適當縮小光圈或降低聚光器以增大反差,便於觀察。鏡檢時要仔細辨別是細菌的運動還是分子運動(即布朗運動),前者在視野下可見細菌自一處遊動至他處,而後者僅在原處左右擺動。細菌的運動速度依菌種不同而異,應仔細觀察。
結果:有鞭毛的枯草杆菌和假單胞菌可看到活躍的運動,而無鞭毛的金黃色葡萄球菌不運動。
上一篇:細菌的兩種鞭毛染色法
下一篇:食品平板菌落計數