組培相關問題十二

32.請問：（１）接種前，接種工具要浸泡在酒精中，所使用的酒精濃度該是多少，是75%還是95%？（２）我用新鐵炮百合鱗片作外植體，對鱗片切割有沒講究什麽方法，可以減少汙染，書上講根據極性方向接種到培養基上，怎麽判斷極性呢？（３）使用玻璃瓶＋不誘鋼的蓋子作為培養容器，透氣性是不是不好，會影響培養效果嗎？
答:接種工具接種灼燒前浸泡酒精的濃度，可以是75%也可以是95%的。至於極性指的就是植物材料有趨向發育的特征。比如是莖繁，靠近莖頂端發出芽子，遠離頂端會長出根。是根繁的話，新芽發生於近心端，新根發生於遠心端。因此在接種時，盡量不要使材料倒置，盡量保持植物的極性方位，不能將莖端插入培養基內。培養容器的透氣性是決定瓶內濕度和氣體狀況的主要因素，因此如果過於密封，使瓶內外得不到氣體交換，就會不同程度的受到影響。

33.有什麽方法可以是懸浮培養的植物細胞分散開,形成單細胞？
答:首先選擇一塊外觀疏鬆、容易碎裂、生長快的淺色愈傷組織，用接種器具簡單粉碎後，放到液體培養基中震蕩培養，經過1－2周的培養後，懸浮液中既有遊離的單細胞，又有較易破碎的細胞團，也有大的愈傷組織塊。為了提高培養物中單細胞的比例，在繼代培養時，需要用細口的移液管或注射器，隻吸出遊離的單細胞或小的細胞團來接種。必要時可加入少量果膠酶，培養基中和瓶壁上會有大量的單細胞和小細胞團，把他們收集後，轉移到新鮮培養基中，放到搖床上再次繼代培養。
也可將第一代細胞懸浮液停止震蕩使大的細胞塊和組織沉澱於容器底部，取上部懸浮液進行接種，或在無菌條件下用紗布、不鏽鋼網過濾，用濾液接種。對於分散性不好的材料，經過多次轉接後，分散程度會大大提高。