一、實驗原理
革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結晶紫進行染色，再用碘液媒染，然後用乙醇(或丙酮)脫色，最後用複染劑(如番紅)複染。經此方法染色後，細胞保留初染劑藍紫色的細菌為革蘭氏陽性菌；如果細胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細菌染上複染劑的顏色(紅色)，該菌屬於革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色反應是細菌重要的鑒別特征，為保證染色結果的正確性，采用規範的染色方法是十分必要的。 芽孢染色法的基本原理，用著色力強的染色劑孔雀綠或石炭酸複紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進入菌體也可進入芽孢內，進入菌體的染料經水洗後被脫色，而芽孢一經著色難以被水洗脫，當用對比度大的複染劑染色後，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成複染劑的顏色，使芽孢和菌體更易於區分。
二、試劑與器材
1、材料：枯草芽孢杆菌12～18h營養瓊脂斜麵培養物，大腸杆菌約24h營養瓊脂斜麵培養物
2、試劑 革蘭氏染色液(結晶紫液、碘液、95％乙醇、番紅液)。5％孔雀綠水溶液
3、實驗器材 小試管、滴管、燒杯、試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無菌水、顯微鏡等、接種環、雙層瓶(內裝香柏油和二甲苯)、擦鏡紙、生理鹽水等。
三、實驗內容
1、革蘭氏染色法 製片→初染→媒染→脫色→複染→鏡檢。
2、Schaefer-Fulton氏染色法 製片→染色→水洗→複染→水洗→鏡檢。
四、關鍵步驟及注意事項
1、塗片時，生理鹽水及取菌不宜過多，塗片應盡可能均勻，
2、乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關鍵環節，嚴格掌握脫色時間。
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