所謂病毒提純,就是應用各種物理、化學方法,以不使病毒受損傷和失活為前提,去除宿主細胞組分等非病毒雜質,提取出高純度濃縮的病毒樣品。病毒提純是病毒學研究的重要前提,病毒微細形態結構的研究、病毒抗原蛋白的分離提純、病毒化學成分及其遺傳物質——DNA或RNA的詳細研究都需要高純度的病毒樣品。病毒純度隻是一個相對的概念,很難有絕對的標準,通常以下幾點可以作為判定依據。
1.物理均一性:測定病毒樣品的物理均一性,是證明其純度的常用方法,包括電鏡檢查、病毒粒子沉降係數和擴散常數及其在凝膠電泳、等電聚焦中的遷移率等。
2.病毒滴度與蛋白含量的比例:測定病毒材料的感染力或其血清學反應 滴度與其蛋白含量的比例,也是一種通常采用的純度測定方法。病毒滴度對蛋白含量的比例越高,說明病毒的純度越高。
3.免疫學反應:免疫反應單一而無非特異反應,則說明病毒材料比較純淨。
4.結晶形成:病毒粒子在十分純淨的情況下,經常可以形成結晶,但少數混有雜質的病毒樣品亦可形成結晶,所以這也隻是一個相對標準。 病毒提純的主要依據和條件有:(1)病毒隻在活的細胞內寄生、複製和增殖,要在病毒不失活的前提下,使之從細胞中釋放出來,去除細胞成份。有些病毒如痘病毒、正粘病毒、副粘病毒、披膜病毒,病毒粒子被釋放到細胞外,可以從培養液或尿囊液中提純;而另一 些病毒如腺病毒、乳多空病毒、小DNA病毒,在毒粒成熟後隻有少數病毒釋放到細胞外,大量提純時必須首先裂解細胞,使病毒大量釋放。實驗室常用凍融、研磨、高速搗碎、超聲 波處理或高壓衝擊、中性去汙劑裂解、蛋白酶解等物理和化學的方法。通過這些方法處理獲得的粗製的病毒懸液,其中常含有大量的細胞碎片,一個有效的方法是以2 000~ 6 000r/m in離心30~40分鍾,可除去90%以上的細胞碎片和雜質。
(2)病毒粒子實際上是大的蛋白顆粒,可以應用提純蛋白質的一些技術方法。
(3)對大小、形狀和密度高度一致的病毒粒子, 可以采用分級分離的技術。當然不同的病毒,其生長特性及理化學性質不同,因此提純方法也不盡一致。
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