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沉澱法-病毒提純方法



錄入時間:2009-6-26 9:19:46 來源:青島betway必威西汉姆联

主要是從稀的懸浮液中濃縮病毒,有中性鹽沉澱法、聚乙二醇(PEG)沉澱法、有機溶劑沉澱 法、等電點沉澱法、皂土法和魚精蛋白沉澱法等。 
 1.中性鹽沉澱法病毒一般在45%以上飽和度的硫酸銨溶液中沉澱,且保持其感染性。在含有病毒的組織培養液中加入等體積的飽和硫酸銨,可以很容易地沉澱某些病毒如狂犬病毒、雞新城疫病毒等。 
 2.聚乙二醇沉澱法聚乙二醇(PEG)為水溶性非離子型聚合物,具有各種不同的分子量,用於病毒沉澱的主 要是分子量為2 000~6 000的PEG。將PEG配成50%左右的溶液,或直接將固體PEG加於病毒懸液中,使其達到所需濃度,通常在4℃攪拌過夜,然後離心使病毒沉澱。Tanncock(1985年) 成功地用PEG濃縮了禽腦脊髓炎病毒。 
3.有機溶劑沉澱法甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用於提純病毒,但乙醚、氯仿等脂溶劑對於具有脂質囊膜的病毒具有破壞和滅活作用,故不適於這類病毒的濃縮提純。 
 4.等電點沉澱法病毒粒子在等電點時,所攜帶的正電荷與負電荷相互中和,因而失去相互排斥的作用而發生沉澱。多數病毒的等電點在pH4.5~5.5之間,因此在pH3~6範圍內均可沉澱,由於一部分細胞成份在等電點時亦發生沉澱,此法效果不太理想,但從感染的組織培養液中濃縮病毒,可以獲得較好結果。應用酸性範圍的等電點沉澱或分級沉澱病毒時,必須注意pH對病毒活性的影響及病毒粒子電荷與組織蛋白電荷的差異。 
 5.皂土法Girin(1989年)應用皂土在酸性條件下(pH4~45)吸附輪狀病毒SA11,再在堿性條 件下(pH85),又使其洗脫下來,從而達到純化目的。
6.魚精蛋白沉澱法魚精蛋白為堿性蛋白,具有攜帶其它蛋白質共沉澱的作用,能和直徑大於50nm的病毒 共同沉澱而不影響病毒的感染力。當向這種沉澱物加入1mol/L NaCl時,病毒又重新釋放到懸液中,而魚精蛋白仍然沉澱。直徑小於50nm的小型病毒則不與魚精蛋白共同沉澱。因此, 可利用魚精蛋白去除病毒材料中直徑大於50nm的異種蛋白質。

 

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