欲作病毒分離的材料，無論是上代病毒培養物，還是采自發病或死亡動物的病料 ，都應盡快送往實驗室作病毒分離或鑒定。一般情況下，如果運送或保存不超過4天，則標 本應置於中性溶液中，於4℃ 保存，不要冷凍，因為一次凍融遠比短期保存於上述條件下引起的病毒感染滴度下降多得多 ，-10℃～-20℃的冷凍會使大多數病毒的感染性嚴重下降。如長期保存，可凍存於-30℃或 更低的溫度，-30℃低溫保存的病毒材料(除少數例外)，至少可以存活幾個月以上；而-70℃低溫保存的病毒，甚至幾年不見毒力降低。懷疑為皰疹病毒的感染材料，應置-50℃或4℃保存，因為皰疹病毒在-20℃的存活時間反而不如4℃。不過，將感染材料磨碎後置於-20℃的甘油或脫脂牛乳中，則可保存幾個月，而 感染力並不明顯下降。由現場采取病料，操作必須迅速，特別是在夏熱季節，應盡快將病料置冰鹽 混合的冰瓶內(溫度可達零下幾度到十幾度)，送往實驗室或冷藏地點。對腦炎病毒、流感病 毒和口蹄疫病毒等，這可能是關係到病毒分離能否成功的關鍵。
(一)病毒材料的準備 如果隻是將某種病毒培養物作病毒傳代，則吸取少量原培養物種入新的細胞培養 瓶中即可。在溶(殺)細胞性病毒，由於細胞破壞，絕大多數的病毒粒子釋出於細胞外的營養 液內，因此應用上清液作為接種物。但在細胞結合性病毒，例如某些皰疹病毒，應將細胞凍 融幾次，促使細胞崩解，並用大口吸管充分吹打，用其懸液作為接種物。由動物病料分離病毒時，需根據病料種類作適當的處理：〖ZZ(〗腦、肝、肌肉等器官或組織〖ZZ)〗〓取一小塊，充分剪碎後置乳缽中加石英砂研 磨，或加入到玻璃研磨器中研磨。隨後加 入5倍量的Hanks液(內含200μg／ml鏈黴素和200單位／ml青黴素)，製成乳劑後移入滅菌 試管中。如果條件許可， 可以將其置於預冷至-20℃以下的酒精中迅速冷凍，並速置37℃溫水中融化，使細胞內的病 毒充分釋出。以2000r/min的速度離心沉澱10分鍾後取上清液作接種物。〖ZZ(〗鼻液、 乳汁、 膿汁等分泌物或滲出物〖ZZ)〗〓這類分泌物或滲出物內經常含有大量細菌，所以應加入 高濃度的 抗生素作預處理。即用內含青、鏈黴素的Hanks液(每毫升含1 000單位及1 000μg的青、鏈 黴素)將其稀釋3～5倍，充分混勻懸浮後，置4℃冰箱內感作2～4小時或過夜，如上離心沉澱 後取上清液作接種用。〖ZZ(〗咽喉拭子〖ZZ)〗〓仔細用棉試子擦拭咽喉部，並迅速將 其泡入盛有2～5ml Hanks液 的試管內，Hanks液內含2%犢牛血清和相應濃度(200～500單位或μg／ml)的青、鏈黴素。充 分涮洗棉拭子，並如上法反複凍融3～5次後，收集液體部分，以2 000r/min的速度離心沉 澱10分鍾後取上清液作接種用。〖ZZ(〗糞便〖ZZ)〗〓可用棉拭子插入肛門沾取，或撲殺 發病動物後由腸管采取，低溫保存。接種前將其如上述鼻液的處理方法那樣，稀釋於含有2% 犢牛血清的Hanks 液內，但稀釋倍數應達10～20倍。抗菌素含量為每毫升1 000單位(青黴素)和1 000μg(鏈黴 素)。4℃感作4小時或過夜後，以2 000r/min的速度離心沉澱10分鍾，取上清液作接種用 。〖ZZ(〗無菌的體液或雞胚液〖ZZ)〗〓可不作任何預處理，直接作接種用。
上一篇：病毒的分離和鑒(滴)定
下一篇：接種方法
