1、噬菌體分離
(1) 以新鮮鴿糞4g 加入100ml 普通液體培養基內，放入37 ℃溫箱培養24h。(2) 次日從中取出10ml70 ℃加熱30min ,離心2000r/ 10min ,上清液用濾器過濾後保存於4 ℃冰箱備用。(3) 在普通瓊脂平板底麵分別注明1、2、3 號。(4)在1 號平板接種事先培養好的6h 幼齡菌乙型副傷寒杆菌一接種環；2 號平板接種幼齡菌福氏痢疾杆菌一接種環;3 號平板接種幼齡菌大腸杆菌一接種環,各平板的細菌密集塗布於瓊脂平板表麵。(5) 再用無菌接種環取鴿糞培養濾液一接種環,分別滴加於3 個已接種細菌的平板中央,放入37 ℃溫箱孵育24h。
2、噬菌體的分離和鑒定
先後從農貿市場采集各類海產品158 份, 分別用15 株假單胞菌作指示菌, 共分離到27 株噬菌體, 分離率為1711%。檢出的噬菌體經實驗室反複增殖、裂解等鑒定試驗, 從中精選出9 株裂解力較強, 生物學性狀較典型的噬菌體, 分別用雙層瓊脂法作單斑純化培養。這9 株噬菌體的噬菌斑圓形透明, 邊緣有的整齊有的稍不整齊, 直徑均在110～210 mm; 在電鏡下的形態可見有頭部和尾部, 均呈蝌蚪狀; 增殖液的效價均可達10829pfuˆm l。
3、噬菌體的分離
在有指示菌的雙層瓊脂平板上逐格滴加備用的待檢噬菌體液,進行交叉裂解試驗,即每一株菌均被所有待檢噬菌體液逐一滴加。待平皿幹後,置37 ℃培養過夜。若有相應的噬菌體存在,即可在平皿上出現裂解噬斑(即為陽性) ,不裂解者為陰性。對分離到的每一噬菌體均經單噬斑分離純化3 次以上,增殖後置4 ℃冰箱保存。
上一篇：藥敏試驗方法
下一篇：支原體的計數
