雷公藤以芽繁芽組織培養研究一
錄入時間:2009-6-30 15:15:45
來源：青島betway必威西汉姆联
摘要：以雷公藤莖段為材料，用正交試驗設計來尋找其組織培養的最佳配方，結果表明：芽段在MS 十NAA 0.01mg/L 培養基中，可萌動產生新葉和新芽；在增殖培養中，以1 / 2 MS 十6 一BA lmg/L + NAA 0.2mg/L 組合月增殖係數最大，達5.38 ，且芽生長最好；在生根培養中，以1 / 2 MS + ABT 一1 # 0.6mg/L + I BA 0.3mg/L 的生根率最高，達80.8 ％。
關鍵詞：雷公藤；以芽繁芽；組織培養；正交試驗
雷公藤，又名黃藤根、斷腸草、菜蟲藥、南蛇根、三棱花，旱禾花等，屬衛矛科（Celastraceae ）雷公藤屬攀緣藤本植物。雷公藤的根、葉、花、果均可人藥，是治療類風濕病、腎炎、外科皮膚病及癌症等多種疾病的重要野生傳統地道中藥材。《本草綱目》 一書中載有此藥。雷公藤四季開花，夏秋兩季芳香濃鬱，春冬兩季微有香氣。四季栽培，可美化環境。近年來，隨著市場對雷公藤原料需求的日益增長和野生資源的日益枯竭，雷公藤的資源培育和合理利用引起了有關部門和企業的重視，開展其快繁技術體係的研究勢在必行。據斯金平等報道，浙江省得恩德製藥有限公司2002 年在浙江新昌、麗水進行雷公藤GAP 基地建設試驗，美國國立腫瘤研究所等國外科研單位也在福建泰寧建立了雷公藤基地。賴呈純等以帶腋芽的幼嫩莖段為外植體，研究雷公藤的離體快繁技術。結果表明：附加2.omg/L BA 和0.lmg/L IBA 的MS 固體培養基可誘導腋芽萌發，誘導率達95 % ; 附加3.omg/L BA 和0.lmg/L IBA 的Ms 固體培養基為適宜的芽苗繼代增殖培養基，增殖率可達5.21 ，但未涉及到生根培養。本研究針對福建省三明地區經過優良選育的雷公藤無性係進行以芽繁芽組織培養試驗，期望為建立成熟的生產技術體係和實現雷公藤工廠化生產奠定基礎。1 材料與方法
采用三明地區經過選優的300 株雷公藤扡插苗，以芽為誘導材料。采回的枝條自莖尖開始按1.2 一1.5 cm 剪取芽條，外植體消毒過程為：洗衣粉＋滅菌淨溶液一0.1％多菌靈溶液、流水衝洗1.5h 一0.4 ％的滅菌淨溶液升70 ％乙醇一0.1 ％升汞溶液一無菌的0.1 % CaCl2溶液。
接種時，芽以形態學下端插入培養基中並注意防止芽原基接觸培養基。每瓶接1 個芽段，按標記分開放在培養室培養，2 一3d 觀察1 次，挑出汙染的組培瓶以減少汙染源，記錄結果。
1.1 啟動培養試驗
經過預試驗，初步認為在啟動培養時，芽主要是靠自身的營養來支持其萌動，培養基的成分對芽的萌動培養並無明顯的影響，主要影響因子是外源激素。因此，本研究在啟動培養中對細胞生長素3 個水平和細胞分裂素2 個水平進行試驗，設計見表l 。每瓶1 個芽，每處理50 瓶，3 次重複。1 個月後，調查芽萌動的情況。
1.2 增殖培養試驗
采用L9（34 ）正交試驗設計，對培養基、細胞生長素和細胞分裂素3 個水平進行試驗，設計見表2 , 每瓶6 個芽，每處理10 瓶，3 次重複。
1.3 壯苗培養試驗
增殖培養的芽苗，大多數矮小纖細。為了提高生根率，需經過壯苗培養，壯苗培養也保證組培苗在煉苗移植過程中有較高的成活率。壯苗的培養基與激素配比為：l / 2 MS + NAAO.lmg/L 。
1.4 生根培養試驗
通過采用正交試驗設計研究雷公藤再生植株生根時的最佳培養基與最佳激素濃度配比，其因素與水平采用L9(34)設計，見表3 。
培養基pH 值為5.8 ，蔗糖35 酬L ，卡拉膠5.5 g 。滅菌。每個試驗號接種10瓶，每瓶接種6 株，重複3 次。
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