水生雙RNA病毒屬（Aquabirnavirus）

水生雙RNA病毒屬（Aquabirnavirus）

同義名：雙RNA病毒屬（\%Birnavirus\%）[BT(2+1]傳染性胰壞死病毒（Infectious pancreasic necrosis virus）,同義名：鱒魚傳染性胰腺壞死病毒（Infectious pancreas necrosis virus of trout）〖HT5SS〗傳染性胰壞死病是鮭科魚的一種高度接觸傳染性的急性病毒性疾病，主要發生 於人工養殖的虹鱒魚場，20周齡以內（一指長，開食後不久）的虹鱒魚苗最為 易感。病魚典型症狀為遊動異常，沿身體縱軸劇烈轉圈，此後可能因衰竭而臥 底不起，不久死亡。病魚體色深暗，腹部膨脹，眼球突出，皮下出血，死亡率 在10%～90%之間。剖檢見胃及前腸中有粘稠的牛奶樣內容物，並常見有出血斑 。病理組織學變化主要是胰腺組織壞死，有時波及附近的脂肪組織，在變性的 胰腺腺泡組織內，可見圓形或卵圓形的胞漿內包涵體。本病最早於1941年在北美發現，1960年證實其病原為傳染性胰壞死病毒（IPNV ）。此後傳至歐洲。目前除澳大利亞和新西蘭外，其它各產魚國均有發現，是 最重要的魚病之一，許多國家列為均將本病魚類進口的重點檢疫項目。我國山西從日本 進口的虹鱒魚中也發生了此病，在台灣省從日本鰻及泥鰍分離到的適應於30℃ 水溫的毒株，對非鮭科魚有致病性，令人關注。

1  形態病毒粒子為無囊膜的廿麵體，直徑約60nm。在感染細胞的超薄切片中，核心的 直徑為45nm。 [BT4]2  理化特性具有4種結構多肽Vp1、Vp2、Vp3、Vp4，分子量分別為94kDa、54kDa 、31kDa和29kDa。Vp1是一種次要蛋白，既能以遊離蛋白形式又能以結合蛋白 形式存在；Vp2是衣殼蛋白的主要成分，為糖蛋白；Vp4是Vp3的裂 解產物，而傳染性法氏囊病病毒和果蠅X病毒的Vp4是獨特存在的多肽。基 因組每個節段RNA都與Vp1相結合，因此每個病毒都有4個分子量為94kDa的結 合蛋白。基因節段A為3 092bp，內含一個大的開放閱讀框架（ORF），編碼一個104kDa 的多聚蛋白（polyprotein），其排列順序為5′前Vp2(62kDa)NS(27kDa)Vp33′，以後再共轉譯成二個片段，即前Vp2和NS－Vp3。在 病毒成熟過程中，前Vp2再進一步裂解成Vp2。現已證實，NS多肽的羧基端 含有病毒蛋白酶的活性位點。基因節段B為2 784bp，編碼Vp1和一假定的RNA 聚合酶。病毒對環境因素的抵抗力極強，是已知魚類病毒中最穩定的。在水中存活時間 可超過230天，在粘液中超過210天，在50%甘油中4℃存活2年半。在4℃水中毒 力至少可維持 5～6個月，在4℃幹燥環境中殘餘毒力可維持4周以上。在10℃的 自來水中可存活7個月以上，60℃加溫一小時不能使其完全滅活。未經處理的海 水17天後即不再能檢出病毒，但上述的水如經過濾或高壓處理，病毒存活的時 間將延長4倍。臭氧在軟水中30秒鍾可滅活病毒，在硬水中則需10分鍾。30%福 爾馬林、2%燒堿、有機碘、紫外線及γ射線可迅速滅活病毒。3  抗原性根據抗原性的差異，過去將傳染性胰壞死病毒分為3個亞型，即IPNVSp、IPNVAb 及IPNVVR299，前二株作為歐洲毒株的代表，後一株作為美洲株的代表。1985 年Hill將所報道的毒株重新分類，按其血清學關係分為兩組，1組有9個血清亞型，2 組有1個亞型，見表20-2，Chrisfie等（1988）報道1組的另一新亞型IPNVN1。已在實驗室內證實IPNV血清型間的基因片段重組。毒株間的毒力亦有較大的差異，在自然條件下IPNVSp株的毒力較強，經細胞 培養傳代可致弱，最終變為無毒株。[FQ(15。20,Y-WZ][HT5”H][JZ]表20-2〓IPNV的血清學分型[HT6SS][HJ 2][BG(!][BHDFG2,WK6,K9,K6W]血清型[]代表宿主[]流行區域[BHDG21]1組IPNVSpIPNVAbIPNVHeIPNVTeIPNVWBIPNVJaIPNVC 1IPNVC2IPNVC3IPNVN12組IPNVTV[]虹鱒虹鱒狗魚櫻蛤虹鱒美洲紅點鮭,虹鱒鮭虹鱒歐鱒鮭 櫻蛤、鯉[]歐洲、北美歐洲、亞洲歐洲歐洲北美、亞洲加拿大 加拿大加拿大加拿大歐洲歐洲[BG)F][HT][HJ][FQ)]IPNV的Vp2與中和抗體產生有關，針對Vp3的單克隆抗體不能 中和病毒粒子的感染性。IPNV中的一些分離株（如IPNVSp、IPNVAb及IPNVWB ）在pH60的條件下能凝集某些品係小鼠（BALB/C）的紅細胞。

4  培養病毒易於適應新鰭類魚的傳代細胞培養物，最常用的易感細胞為CHSE214及RTG2 細胞係，均可產生細胞病變。在RTG2還可形成清晰易辨的蝕斑，特征為死亡細 胞皺縮拉長成網狀。較新的細胞係AS及PG也很常用，FHM或BF2雖也可用，但有 時不產生細胞病變。培養溫度4～30℃，一般用20℃，複製周期為16～20小時，通 常在48小時培養後出現以細胞崩解為特點的細胞病變。如用26℃培養，病毒 增殖加快，在9小時內即可出現細胞病變。IPNVSp株在RTG2傳代的過程中毒力 減弱，蝕斑從05mm增大至2mm，後者成為無毒株。來源於兩棲類、鳥類或哺乳 動物的細胞不能支持IPNV增殖。

5  病原性病毒主要危害鮭科魚，20周齡的虹鱒魚最為易感。成年鮭科魚感染後常無症狀 ，成為帶毒者，此種魚在疫區占有相當比例，終身排毒。主要經糞、精液或卵 ，尿也有可能。糞的含毒量很大，汙染池水中的病毒高達每升105 TCID50 。非鮭科魚及貝類可能作為病毒貯主，但從它們體內所分離到的毒株對虹鱒 多不致病。水溫對魚病來說至關重要，已證實感染IPNV的虹鱒魚苗在6℃下死亡率要大大低 於在10℃的死亡率，而在16℃時則完全沒有損失。河鱒也有類似的情況，在10 ℃時感染IPNV的死亡率為74%，15℃時為46%，而在45℃時所有魚都能耐過 ，這是因為15℃是魚體免疫防衛的最佳溫度，而在45℃則抑製了病毒的複製。病毒經水平和垂直途徑傳播，潛伏期短，典型者隻需3～5天，最初入侵的門戶 為消化道或鰓。病毒對胰腺、性腺及腎組織有親嗜性。近年來研究發現這種病毒有非常廣泛的感染譜。據統計，目前已發現本病毒感 染的動物至少有1種環口動物、37種硬骨魚、6種貝類、2種蝸牛及3種蝦。不僅 能感染淡水魚，也能感染鹹水魚；除冷水魚外，在30℃高溫生長的日本鰻及泥 鰍也發現有感染。[BT4]6  診斷臨床上病毒性出血性敗血症病毒（VHSV）、傳染性造血器官壞死症病毒（IHNV ）都能感染虹鱒等鮭科魚，引起與傳染性胰壞死相似的症狀，確診必須依靠病 原分離與鑒定或血清學檢查。[BT4](1) 病原分離與鑒定采集病魚的髒器、糞液或卵液，供診斷用。帶毒魚則多采集其糞、精液或 卵液。髒器的含毒量以腎最高，其次為胃、肝和脾，肌肉的含毒量最低。髒器 製成勻漿後，再作1∶10或更高稀釋後才可接種細胞分離病毒；糞至少應作1∶20 至1∶50稀釋，以降低其毒性；卵液或精液不必稀釋可直接接種細胞。分離病毒首選的敏感細胞為CHSE214或RTG2，置20℃孵育，5天後如仍不出現 細胞病變則盲傳數代，即可能產生明顯的病變，進一步用熒光抗體、ELISA或中 和試驗確診。有報道，直接將病魚或帶毒魚的內髒用胰酶消化，或由帶毒魚分離的白細胞， 與RTG2同步混合培養，分離效果最好，此法比直接接種腎組織懸液敏感2倍。[HT5H](2) 血清學檢測[HT5SS]最常用的方法為中和試驗、熒光抗體法、ELISA及SPA協同凝集試驗。中和試驗 鑒定分離株應采用IPNV多價抗血清。進一步鑒定分離 株的血清型則需用型特異血清作中和試驗。熒光抗體可用直接法或間接法檢測 抗原以及培養的感染細胞、感染魚的組織材料等。ELISA法適用於流行期大 量樣本抗原的檢測，檢測的靈敏度為1035～1055TCID5０。SPA 致敏IPNV抗血清後，作凝集試驗能直接快速地檢測樣品材料中的病毒。IPNV抗體檢測缺乏實際意義，一方麵由於耐過IPNV感染的虹鱒血清內的抗體可 持續數年，另一方麵IPNV的帶毒者不含或隻含滴度很低的抗體。此外，正常虹 鱒血清中還存在非特異的抗病毒成份，即使稀釋至1∶5000仍能中和IPNV細胞適 應毒，所以在大多數情況下難以判斷抗體的水平及其意義。[BT4]7  免疫人工感染的虹鱒在10℃水溫的環境中約30天後產生IPNV中和抗體，抗體為類似IgM 的四聚體球蛋白，在12～14周後達最高滴度，此後長期存在，可持續數年，但 是中和抗體的真正意義尚不完全清楚。不同亞型之間沒有交叉免疫作用，例如 耐過IPNVAb感染的虹鱒對IPNVSp毒株仍易感。免疫可以被動傳遞，但似不存在母 源抗體。在正常虹鱒血清內還存在一種能中和IPNV的蛋白[CD2]6S因子，它與抗體不同，被 認為是非特異性抗病毒因子。免疫預防尚處於試驗階段。發病魚池可用有機碘作消毒劑；降低水溫，有時也 可見效。