禽呼腸孤病毒（二）

 病原性1954年，Fahey和Crawley首次從有慢性呼吸道疾病的雞呼吸道內分離到禽呼腸孤 病毒，後來由Peter（１９６７）進一步證實。當時用這種被稱為 Fahey Crawley 病毒，接種於易感雞後，表現為溫和性呼吸道疾病，病雞的肝髒壞死並出現腱 和滑膜的炎症。禽呼腸孤病毒流行於雞、火雞、鴨、鸚鵡和其它禽類，可水平 傳遞亦可經卵垂直傳遞。已由多種疾病分離出該類病毒，包括病毒性關節炎、 腱鞘炎、矮小綜合征（Stunting syndrome）、呼吸道病、腸病（Enteric disease）、吸收障礙綜合征（Malabsorption syn drome ）和骨質疏鬆征（Osteoporosis）等。患禽生長受阻，發生心包炎、心肌炎、 心包積水、腸炎、肝炎，腔上囊和胸腺萎縮，骨短粗或出現急慢性呼吸道病。 某些呼腸孤病毒株的致病作用，由於柔嫩艾美爾球蟲或巨型艾美爾球蟲的協同 感染而加強。雞感染傳染性法氏囊病病毒或在特殊的飼養環境下，能增高由WVV2937 株感染所致腱鞘炎的嚴重性。呼腸孤病毒也能加劇由其它病原引起的疾病，如 雞貧血因子、大腸埃希氏杆菌和新城疫病毒。由於感染了呼腸孤病毒，使機體 的免疫功能降低，導致對其它傳染性病因的易感性增加。此外，在臨床上未感 染的雞也常發現病毒。由禽呼腸孤病毒所致的最重要和常見的疾病是病毒性關節炎、腱鞘炎和吸收障 礙綜合征。病毒性關節炎、腱鞘炎: 發生於4～7周齡肉雞，但也可能發生於14～16周齡。主要症狀為跗關節上方脛骨和腱束雙側腫大，腱 移動受限，表現不同程度的跛行。繼而出現腓腸肌腱破裂。1～7日齡雛雞可能 見到肝炎、心肌炎。發病率可達100%，但死亡率低於2%。病雞可能在1～3 周內由急性期恢複，但也可能變為慢性。病雞的肉眼病變主要是兩腿的炎性水 腫。 足 庶 骨骨幹有時因骨膜的成骨性活動增 高而增大。跗關節和脛股關節內經常含有大量的檸檬黃色至棕色血染的液體，有時呈膿性。 組織學病變發生於滑膜、腱、關節和心髒。腱鞘明顯水腫，滑膜細胞肥大和增生。滑膜內有 異染細胞、淋巴細胞、漿細胞和巨噬細胞的浸潤，並有網狀細胞集聚。在慢性病例，腱 鞘纖維化，肉芽組織包圍或取代正常腱。心髒損傷包括心肌纖維之間發生異嗜細胞性浸潤， 並伴有灶狀的網狀細胞增生區。吸收障礙綜合征: 雖然從患有吸收障礙綜合征的病雞中經常分離到不同致病力 的呼腸孤病毒，但是病因關係並不清楚。1～3周齡雛雞吸收障礙的症狀包括色 素沉著不良、羽毛異常、骨質疏鬆、生長不勻、糞便中有未消化的飼料及腹瀉 、死亡率增加等。目前，美國、歐洲和澳大利亞均有報道。最常見的報道是前 胃的膨大，伴有出血或壞死性病變、卡他性腸炎。此外，可能有因關節炎和骨 質疏鬆症而產生的跛行。組織學變化包括有伴發局灶性壞死的前胃炎、心肌炎 、法氏囊萎縮、卡他性腸炎和胰腺炎。股骨生長板有橫向和縱向斷裂以及軟骨 壞死和骨質表麵的破碎。常見淋巴細胞浸潤的小腸絨毛萎縮。近年來，在歐洲發現一種新病，稱之為“藍翅病”(Blue wing disease, BWD)， 其特點為皮下及肌肉點狀出血，胸腺、脾及法氏囊萎縮，對2%～3周齡的幼雞致死 率可高達10%。從病雞分離到兩種致病病毒，一種為呼腸孤病毒，另一種為雞傳 染性貧血因子（CAA）。前者分離率最高的是病變的肌肉和皮膚，若單獨接種易 感雞，隻有很低的致病性，但如將兩者混合接種，則可成功地複製此病。

 

[BT4]5. 診斷 應結合臨床症狀再作病原學檢查或血清學鑒定。

(1) 病原鑒定用無菌拭子采集脛股關節或脛跗關節的滑液或製備10%水腫滑液膜（腱膜）組織 懸液分離病毒，是較能確診呼腸孤病毒感染的方法。還可由脾製備勻漿或從泄 殖腔、氣管無菌棉拭子取樣分離病毒。由於呼腸孤病毒感染的消化道和呼吸道 階段時間短促，樣品在使用前貯存在-20℃條件下。汙染的病料需用抗生素處理 ，再經低速離心沉澱，除去較大顆粒後作接種用。雞胚接種 優選的接種途徑為5～7日齡雞胚卵黃囊，每胚接種01～02ml可 疑病料。接種後3～5天雞胚死亡，死胚明顯出血，胚體微紫，內髒器官充、出 血。17～21天仍存活的胚略顯矮小，肝、脾和心髒腫大並有壞死灶。也可接種 絨毛尿囊膜，形成痘樣病斑和細胞漿包涵體，常於3～5天後死亡。尿囊腔途徑 接種效果通常不好。細胞培養 2～6周齡雞的腎原代細胞對於培養禽呼腸孤病毒優於雞胚成纖維 細胞，亦可用雞胚肝細胞，最好選用5%CO2的培養箱培養。由於呼腸孤病毒普遍存在於禽類的呼吸道和腸道，故從這些部位分離到呼腸孤 病毒，並不就是現症診斷的直接證據，如病毒性關節炎、腱鞘炎。診斷可通過 爪墊接種易感一日齡雛雞，確定這些從受感染關節分離的呼腸孤病毒的相對致 病性，如果有致病性，在接種後72小時之內病毒可誘發爪墊出現明顯炎症反應 。在分離病原的基礎上，利用理化方法或血清學試驗進一步對呼腸孤病毒分離物進 行鑒定。可采用DNA代謝抑製劑如在原代雞腎細胞中用05μg/ml的放線菌素D、100 μg/ml 阿糖胞苷或300μg/ml 5氟2脫氧尿苷，病毒增殖不受影響，則說明為RNA 病毒。進一步用瓊脂擴散和病毒中和等試驗鑒定特異性病原。

[BT4](2) 血清學鑒定瓊脂擴散試驗 常用於檢查呼腸孤病毒的群特異性抗體。抗原由磨碎未稀釋 的感染絨毛尿囊膜（CAM）製備，這些CAM來自標準株卵黃囊途徑接種死亡的胚 。也可應用感染雞腎細胞培養物作為抗原。瓊脂板用優質瓊脂配製，瓊脂含量 為12%，將其溶於001mol/L pH72的磷酸鹽緩衝鹽水中，內加8% NaCl和75%甘氨酸 。甘氨酸可使沉澱線更為清晰。孔徑和孔間距均為3mm，中央1孔，周圍6孔。將 抗原滴入於中央孔中，將待檢血清滴加於周圍孔內，並在第1和第4孔內滴加已 知的陽性血清，作為對照。在有關節病變的雞體內，抗體可能長期持續存在， 但多數雞的抗體可在4周內消失，故在普查雞群的呼腸孤病毒感染時，應每月檢 查一次。經腳掌人工感染的雞，於接種後2～3周，血清中出現瓊脂擴散抗體。 由於呼腸孤病毒在雞群中傳播迅速，因此隻要檢查雞群中1%雞的血清，即可了 解雞群中是否有呼腸孤病毒感染的存在。中和試驗 最好采用雞腎細胞蝕斑減數試驗，即在內含100個PFU（蝕斑單位 ）/01ml的病毒液中分別加入1∶10～1∶5 120不同稀釋的等量待檢血清，混合 後置37℃水浴中感作45分鍾。另以1∶10稀釋的陰性血清同樣混合感作，作為對 照。吸取02ml，接種於60×15mm平皿中的雞腎單層細胞上，任其吸附25小時 後加上7～8ml的覆蓋瓊脂。繼續孵育5%～7天，再加內含0001%中性紅的覆蓋瓊 脂5ml。8～12小時後計數蝕斑。與對照比較，以能抑製90％蝕斑的血清稀釋度 的倒數為血清滴度。通常將效價為1∶40或以上視為陽性。由於需要應用不同血 清型的幾個病毒株以及不同稀釋度的待檢血清，這一試驗的工作量較大。熒光抗體試驗 直接法檢測感染組織內抗原，抗原可在感染細胞、滑液膜或 雞腎細胞的胞漿內證實。若用間接熒光抗體，方法更敏感，更適用於進行定量 分析。ELISA試驗 更適合於群體呼腸孤病毒抗體水平的分析，其結果與中和試驗相 一致，Slaght等首次建立的ELISA方法檢查禽呼腸孤病毒抗體，使用S1133毒株 作為抗原，發現它與Reo25和WVV2939株的抗體發生反應，但同源抗體滴度最高 。目前用於檢測的ELISA係統已商品化。