豬血凝性腦脊髓炎病毒(Hemagglutinating encephalomyelitis virus of pig) 同義名:仔豬嘔吐消耗病病毒(Vomiting and wasting disease virus)。豬血凝性腦脊髓炎是幼豬的1種急性、高度傳染性病毒病。患病仔豬以嘔吐、進行性消瘦及 中樞神經係統功能障礙為特征,死亡率很高。五十年代後期,在加拿大安大略州的乳豬中發現兩種疾病。1958年,Roe和Alexander將 其中1種稱為嘔吐消耗病(VWD);1959年,Alexander將另1種稱為安大略腦脊髓炎 。 但後者除發生腦脊髓炎,呈現中樞神經係統障礙,病程較急(3~5天)之外,其它方麵與嘔吐 消耗 病極為相似。其後分別從這兩種病豬身上分離到病毒,並證明這兩種病是由同1種冠 狀病毒引起的,將這種病毒命名為血凝性腦脊髓炎病毒(HEV)。本病在世界各地分布很廣,近年來歐美很多國家如加拿大、英國、美國、比利時、瑞士、法 國、德國、澳大利亞等相繼有所報道。我國台灣省母豬的陽性率也很高。
1.形態特征病毒粒子一般呈圓形。電鏡觀察時的直徑為100~150nm,內有1個致密的核 心,直徑為70~130nm。外圍有囊膜,囊膜上有梨狀纖突,長20~30nm。據對1株HEV(67N株) 病毒 粒子(不包括纖突)的測定,直徑為70~100nm(平均90nm),纖突的長度為15~17nm。因此, 完整的67N株病毒粒子的直徑約120nm。
2.理化學特性本病毒含RNA。羥胺和嘌呤黴素能幹擾豬腎細胞內的病毒複製,鹵化脫氧尿核苷和 金剛胺則不起作用。67N株在氯化銫中的浮密度為121g/cm3。加拿大株的酒石酸銻鉀浮 密度為181g/cm3。病毒對乙醚、氯仿和去氧膽酸鈉等脂溶劑敏感,以乙醚處理後,病毒失去血凝性和感染性。 病毒對熱敏感。56℃5分鍾即被滅活,在37℃隻能存活24小時。但在低溫和凍幹時較穩定。 在冰凍狀態下活存1年以上。含毒培養液的低壓凍幹製品長年不喪失感染力。
3.血細胞凝集和吸附作用病毒凝集和吸附小鼠、倉鼠、大鼠、雞和火雞的紅細胞,但不與豚鼠、犢牛 、綿羊、豬、鵝、馬、兔和人的紅細胞發生作用。紅細胞受體不被受體破壞酶破壞,經受體 破壞酶處理的紅細胞,仍能為HEV所凝集。因為病毒缺乏神經氨酸酶,吸附的紅細胞不能 洗脫。粘液素能抑製血凝。測定血凝效價時,可取已經洗滌的05%雞紅細胞懸液05ml(pH 72 PBS),加入到等量的連續2倍稀釋的各管病毒液中,22℃孵育1小時後,觀察結果。引 起細胞凝集的最大稀釋倍數的倒數,即為其血凝效價。檢查紅細胞吸附作用時,先將感染細 胞培養液棄掉,加入等量的01%紅細胞液(以Earle液配製),經10、20、30分鍾以及數小 時後,檢查培養物,看有無紅細胞吸附現象。
4.抗原性通過血細胞凝集抑製試驗和病毒中和試驗,證明HEV現有各毒株都是同型的。英國 的嘔吐消耗病毒株與加拿大的HEV毒株也有密切的抗原關係。曾有1個被稱為HEV 18株的豬 血凝性腦脊髓炎病毒,雖能在豬腎細胞培養物上產生多核融合細胞,但與已知的HEV毒株都 無親緣關係。最近被鑒定為副流感3型病毒。HEV與傳染性胃腸炎病毒以及其它冠狀病毒沒有 抗原關係。
5.培養HEV能在原代豬腎細胞和豬甲狀腺細胞的胞漿內增殖,並以向胞漿空泡內出芽而成 熟。不能在猴、牛、羊、兔和小鼠細胞上生長。其特征性細胞病變是多核巨細胞的形成。 在接種病毒後12~16小時即可見到多核巨細胞(融合細胞)。早期多核巨細胞的形態不 定,通常略呈圓形,含有許多折光體,這些折光體就是核。幼齡巨細胞,胞漿十分清晰。隨 著培養時間的延長,細胞增大。在早期,1個細胞隻含幾個細胞核。至後期,1個細胞可含 40個以上的細胞核,均聚集於細胞的中心區。巨細胞的發生較快,出現退行性變化也快。形 成後數小時,許多多核巨細胞的胞漿內形成空泡,核濃縮致密化,繼而變得比較不透明,最 後卷縮,形成不規則的細胞塊,並從細胞層脫落,漂浮於培養液中。這種細胞病變一般在48 小時內完結,此後隻殘留一些有抵抗力的細胞。在某些巨細胞的胞漿中能看到類似胞漿內包 涵體的結構。在染色片上,這些呈藍色的小體形態為顆粒狀,不規則,位於胞漿空泡內。這 些小體並 不常見,而且與巨細胞的發展階段沒有關係。未曾見到核內包涵體。
6.病原性本病毒隻侵害1~3周齡的乳豬,不感染其它動物。被感染的乳豬可出現兩種病型 :1種以腦脊髓炎症狀為主;另1種以嘔吐消耗病為主。兩者可能出現某些共同症 狀。腦脊髓炎型多發生於兩周齡以下的仔豬。首先表現厭食,繼而發生昏睡、嘔吐和便秘,病豬 聚堆,被毛逆立,末端發紺,並常呈現噴嚏、咳嗽和磨牙等症狀。大多數病豬在發病1~3天 出現中樞神經症狀,表現過敏,後軀麻痹,呼吸困難,失明,眼球震顫,死前不久昏迷。病 程約10天,病死率高達100%。嘔吐消耗病型也在出生後幾天發病。最早的症狀是惡心和嘔吐,嘔吐物有惡臭味。某些 病例 嘔吐不明顯,但不食,常發生便秘,喜喝水,繼而咽喉肌麻痹,不能吞咽。病程數周。部分 病例可以康複。病理變化可分為中樞神經係統變化和呼吸道變化,但肉眼變化均不明顯。某些腦 脊髓炎病例呈現輕度的卡他性鼻炎。某些嘔吐消耗病病例,僅見胃腸炎變化。組織學檢 查可看到非化膿性腦脊髓炎的病變。在嘔吐消耗病病例,也有25%的腦組織呈現非化膿性 腦 脊髓炎變化。最嚴重的病變見於間腦、橋腦和延腦以及前部脊髓,而且幾乎都限於灰質部分 。人工感染未吮初乳的仔豬,能規律地引起感染,潛伏期4~6天,病豬呈現與自然發病類 似的症狀。
7.生態學病毒經口或鼻感染仔豬時,病毒可在扁桃體、喉、氣管、肺、食管、胃和十二指 腸存在約48小時,在後腦內存在約72小時,在糞和直腸拭子內未能檢出病毒。一般認為,病 毒的正常棲息場所是上呼吸道和腦橋、 延腦等組織。通 過排出的鼻分泌物傳播本病。成年豬可發生非顯性感染,並可排出病毒10天以上。本病毒不 發生子宮內感染。感染 母豬對乳豬提供乳汁抗體。確立感染以後,病毒在豬群中能存在多久,在自然排泄物中的穩 定性如何,均不清楚。
8.免疫尚無有效疫苗。在臨產前2~3周,使母豬感染HEV,經數日後即可產生自動免疫, 仔豬可通過初乳獲得保護。
9.診斷根據症狀和流行情況隻能作出推測性診斷。沒有下痢症狀,是與 傳染性胃腸炎明顯的不同之處。為了確診,必須進行病毒分離或血清學試驗。
(1)病毒分離和鑒定:無菌采取病豬的呼吸道分泌物、後腦或脊髓,按常規方法製成接 種材料,接種於胎豬腎原代細胞培養物。從接毒後12小時起,注意觀察細胞培養物內有無融 合 細胞形成。48小時後,用雞紅細胞進行血凝試驗和血細胞吸附試驗,如為陽性,再進行血凝 抑製試驗、血細胞吸附抑製試驗或血清中和試驗作進一步鑒定。也可用HEV熒光抗體染色 法檢查細胞培養物,病毒抗原隻見於胞漿內。熒光常見於靠近核的部位。感染細胞培養液先經3 000r/min離心沉澱,去除較大顆粒後,再用超速離心獲得的沉澱物 作磷鎢酸負染後電鏡觀察,可見典型的冠狀病毒粒子。也可進行免疫電鏡檢查。
(2)血清學試驗:豬感染病毒後,第7天可產生抗體,2~3周達最高效價。因此,從發病仔 豬的母豬或同窩存活的仔豬采取血清,進行血凝抑製試驗、血細胞吸附抑製試驗或血清中和 試驗,常可達到診斷目的。
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