流行性乙型腦炎病毒的血清學診斷

 

　　(2) 血清學診斷：包括補體結合試驗、血凝抑製試驗以及中和試驗。血凝抑製抗體和 中和抗體存在於IgM和IgG兩種免疫球蛋白中，而補體結合抗體隻存在於IgG部分內。　

　① 補體結合試驗：特異性較高，是流行病學上確認乙腦的一種常用方法。 但因補體 結合抗體的出現較晚，動物大多於發病後2周左右才呈陽性反應， 故隻作為回顧性診斷 之用。作者等對小鼠作人工感染試驗，在腹腔接種亞致死量乙腦病毒以後， 補體結合抗體於接種後11～12天達陽性效價。4匹人工感染馬(見“病原性”節) 在接種 後10～14天開始呈現陽性效價。補體結合抗體在動物體內的維持時間不超過一年。通常以 被檢血清1∶4稀釋度呈“++”反應強度時判為陽性。 但因人及動物中隱性感染的大量存 在，近年來又普遍應用疫苗接種，因此，根據單份血清的測定結果，往往不能作出肯定 診斷。隻有發病早期和恢複期雙份血清的抗體效價對比，才有診斷價值。一般是在初診 時和恢複期(病後2～3周以上)各采血1次，並在同一次補體結合試驗中進行測定。 如果恢 複期血清比初診血清的效價增高4倍以上，即可判為陽性， 說明患畜這次發病是由乙腦 引起的。　　補體結合試驗的操作方法請參閱本書第十四章。

　　② 血凝抑製試驗：乙腦血凝抑製抗體較補體結合抗體出現得早， 一般在病後第4～5 天開始出現，病後2周左右達高峰。作者等發現小鼠在人工接種乙腦病毒後 的第7天即開始出現血凝抑製抗體。因此，測定血凝抑製抗體可以較早地作出診斷。  關於馬騾血凝抑製抗體的陽性價，國內沒有標準，作者等根據疫區和非疫區乙 腦流行期前後近200匹馬騾血清的兩次檢測，初步規定1∶ 40以上的血凝抑製效價為陽性 感染價。對臨床單個病例，也應按雙份血清法判定，即恢複期血清的血凝抑製效價為急性 期的4倍以上者才具有診斷意義。　　由於人和動物感染乙腦病毒後，血清中最先產生IgM抗體，數周後才出現IgG抗體， 此時IgM抗體已經減少乃至消失。因此，鑒定動物血凝抑製抗體是IgM還是IgG， 有 著早期診斷的意義。如果血凝抑製抗體是IgM，則即表示該動物是新近感染， 如果血凝 抑製抗體是IgG，則說明該動物是早先的感染。　　測定IgM抗體時，一般應用2巰基乙醇(2ME)法。2巰基乙醇(HS•CH2•CH2OH ) 含 有巰基，可將大分子的IgM抗體裂解成7S的小分子球蛋白，後者沒有免疫活性。因此，  比較同一血清在2ME處理前後的血凝抑製效價，即可查出血清中呈現免疫活性的抗體是 否就是IgM。但是必須指出，2ME裂解IgM的作用是可逆的。如果用透析法將2ME除去，  即可在一定程度上恢複大分子抗體球蛋白及其免疫活性。測定時必須充分注意。　　如上述，乙腦病毒與墨累山穀腦炎病毒、西尼羅病毒和聖路易腦炎病毒比較接近， 在血清學上，特別是血凝抑製試驗和補體結合試驗中出現一定程度的交叉反應，但同種 病毒及其抗體之間的反應效價最高，仔細比較，不難鑒別。應用動態血凝抑製試驗，更 易判定。　

　③ 中和試驗：人或動物感染乙腦病毒後7天左右出現中和抗體。中和抗體在動物體內 的存在時間較長，可達一年以上。因此也需要進行雙份血清測定才有診斷價值。中和 試驗可在小鼠、雞胚或組織培養細胞上進行。通常按固定量病毒和稀釋血清的方法進 行，因為這樣可以直接測出待檢血清的效價(請參閱本書第十四章)。　　王用楫報道用倉鼠腎原代細胞進行中和試驗，方法是將各種稀釋度的待檢 血清01ml、10～100個TCID50的病毒01ml和維持液08ml充分混合，不用感作，直 接加入細胞培養管(小瓶)，於5～6天後判定結果。試用於豚鼠、馬和兒童免疫前後的雙份血 清，都獲得滿意結果。　　④ 酶聯免疫吸咐試驗(ELISA)：Chang等應用生物標記的蛋白A　ELISA，檢測人 、猴、豬、馬、狗、野兔和鼠中的JEV抗體，得到滿意的結果。Ohkubo等應用ESL IA進行了豬的JEV血清流行病學調查。　

　(3) 反轉錄多聚酶鏈式反應(RTPCR)：　　Murakami等應用套式RTPCR法檢測到01ml全血標本中少至3～5個乙腦病毒粒子。 該 法與其它檢測JEV抗原相比,高度特異、靈敏。