二、正痘病毒屬(Orthopoxvirus)
〖HT5SS〗正痘病毒包括痘苗病毒、天花病毒、牛痘病毒、兔痘病毒、小鼠脫腳病病毒(鼠 痘病毒)、水牛痘病毒、駱駝痘病毒、馬痘病毒和猴痘病毒等。痘苗病毒是代表種。正痘病 毒呈磚形，大小為200nm×200nm×250nm,各成員之具有共同抗原，且基因組之間可發生重組 ，血清 學上具有明顯的交叉反應。感染正痘病毒的細胞和病毒粒子的外膜上均有血凝素蛋白，大多 能凝集火雞和雞的紅細胞，但一些痘苗、兔痘HA-自然變異病毒株，不能凝集上述動物的 紅細胞。正痘病毒 能感染源於哺乳動物的大多數培養細胞，但在自然界中有種屬感染特異性。DNA長度為170 ～250bp, G+C含量為36%左右。
(一) 牛痘病毒(Cowpox virus)
牛痘是牛的一種良性疾病，發生於乳牛，主要侵害乳房和乳頭的皮膚。一般通過 擠乳工人的 手或擠乳機而傳染。幹奶的母牛、處女牛、公牛、役用牛和肉用牛等很少發生牛痘。擠乳工 人可將新近接種的痘苗病毒傳染給牛，症狀與牛痘相同。
1.形態和理化學特性 牛痘病毒具有痘病毒的典型形態和理化學特性。基因組大小為222bp。在以水皰液製作的塗 片，經姬姆薩染色，鏡檢可以見到成熟的病毒粒子(原生小體)，應用鍍銀法染色，效果更好 。 牛痘病毒具有血凝素，可以凝集火雞和雞的紅細胞，但其效價較低。
2.抗原性 〖HT5SS〗牛痘病毒在抗原性上與痘苗病毒和天花病毒極為相似。它們之間的微小抗原差 異(有人認為 僅是量上的差別)，可用交叉補體結合試驗、瓊脂擴散試驗和抗體吸收試驗檢出。中和試驗 的特異性更高。
〖BT4〗3.培養 牛痘病毒可在雞胚絨毛尿囊膜上良好生長，並產生出血性痘斑，這是病毒易於侵害中胚層 組織，損傷毛細血管的內皮細胞的結果。大量感染時，雞胚可能死亡。但在40℃以上的溫度 中不能產生出血性痘斑。近年來多次發現引起白色痘斑的突變株。 牛痘病毒可在許多種類的組織培養細胞中生長，於雞胚細胞以及人胚腎和牛胚腎等細胞培 養物內形成蝕斑、合胞體和細胞膨脹等細胞病變。
〖BT4〗4.病原性 病毒在自然條件下隻侵害母牛乳頭和乳房的皮膚。潛伏期為3～8天。病初體溫可能略高，食 欲降低。擠乳時乳頭和乳房比較敏感，局部溫度稍有增高。此後不久，在乳頭和鄰近的乳房 皮膚上出現幾個至10多個紅色丘疹，1～2天後變為豌豆大的水皰，內含棕黃色或紅色的淋 巴 液。此後幾天，水皰中心塌陷，邊緣隆起而呈現臍狀，並迅速化膿，最後結痂，整個病程約 3周。痂皮脫落後，形成白色凹陷的疤痕。水皰可能融合，並常在擠乳時破裂，殘留鮮紅色 的創麵。在無細菌 繼發感染時，病牛常無全身症狀。 〖HT5SS〗本病一旦傳入牛群，即迅速傳播，直到所有母牛均被感染為止。 並常傳染給擠乳工人，在其手、臂甚至臉部出現痘疹，比初次接種痘苗時的病變 還要強烈，病灶常常壞死。 實驗感染時，牛痘病毒易於感染家兔、豚鼠、小鼠和猴。Marennikova等(1975)報道， 在莫斯科動物園的獅子和穿山甲曾暴發過牛痘。牛痘病毒亦可感染象和虎。除皮膚病變外 ，某些動物還發生致死性肺炎。
〖BT4〗5.免疫 牛痘痊愈後，可以獲得長達幾年的免疫力。應用痘苗接種，也能預防牛痘的感染。但因牛 痘並非為嚴重性疾病，且不普遍發生，故隻在特定情況下才考慮應用痘苗接種。 〖BT4〗6.診斷 根據乳頭和乳房皮膚上的特異病變及在牛群中迅速傳播的流行病學特點，可作出診斷。確 診時最好采取水庖液，以磷鎢酸負染後作電鏡檢查，不僅可以看到典型的痘病毒粒子，並可 直接與假牛痘病毒(副痘病毒)、口蹄疫病毒、牛潰瘍性乳頭炎病毒(皰疹病毒)和牛乳頭狀瘤 病毒相鑒別。 基層實驗室可用外科小刀刮取丘疹部皮膚的上皮細胞，或者吸取痘皰內容物，同時刮取痘 基部細胞，塗片後用銀染法染色，於光學顯微鏡的油鏡頭下檢查，可見暗褐色呈現橢圓形或 長方形的 病毒粒子，與標本中汙染的葡萄球菌相比，直徑僅為葡萄球菌的1/3左右。病毒粒 子呈短鏈鎖狀或成對排列。 也可將水皰液接種雞胚、單層細胞或皮膚劃痕接種於家兔的皮膚或眼角膜。牛痘病毒經常於 雞 胚絨毛尿囊上形成紅色的出血性痘斑。家兔角膜在劃痕接種後，第二天在劃痕處發生小的 透明增生，滴上可卡因，切下角膜製備標本，HE染色，可以發現胞漿內的包涵體。如將角 膜 用升汞和酒精固定，可見明顯的圓形混濁斑點。皮膚接種的家兔，出現痘皰，並伴有 寬大的炎 性紅暈。接種病毒的單層細胞，例如雞胚細胞和牛胚腎細胞等，在感染後1～2天產生蝕斑和 細胞病變，並因胞漿突起伸長而呈網狀。感染細胞內出現嗜酸性大型A型包涵體。 如果用化膿的痘皰液或痘皰皮、痂皮作為接種材料，則應充分磨碎，並用青、鏈黴素處理後 應用。 取痘皰材料製成塗片，應用熒光抗體染色，可以檢出病毒抗原，但因非特異性熒光較強，判 定必須慎重，並應設置多種對照。如果先將病料接種組織培養細胞，孵育1～2天後再用熒光 抗 體染色，結果比較可靠。應用痘皰液作抗原，與高價免疫血清進行瓊脂擴散試驗，通常可 在 4～5小時出現特異沉澱線。但如沒有各種特異性抗原作為對照，則難於與痘苗病毒和天花病 毒鑒別。 補體結合反應的敏感性較高。通常采取痘皰液，用生理鹽水作1：5稀釋，1 500r/min離心 沉 澱15分鍾，取上清，58℃加溫30分鍾，作為待檢抗原。如係痂皮，則取1g置幹燥缸內幹燥 4～5小時，用玻璃粉磨細，並加5ml乙醚，振蕩10分鍾，靜置頃刻，吸去乙醚，並置37℃ 加 速乙醚蒸發。用生理鹽水將磨細的痂皮作1：20～1：50稀釋，室溫浸漬2小時，經常振 蕩，然 後以1 500r/min離心沉澱15分鍾，吸取上清液，58℃加溫30分鍾，作為待檢抗原。用高免血 清 按常規方法作補體結合試驗。高免血清一般用家兔製備，即以牛痘病毒對家兔脅腹部作劃痕 接種，待其形成痘皰並結痂，4周後采其血清即成。補體結合試驗也須設置多種標準抗原對 照，才有可能測出牛痘病毒與痘苗病毒和天花病毒之間的抗原差異。
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