抑菌劑在開放組培中的使用及效果研究一
錄入時間:2009-7-13 14:28:16
來源：青島betway必威西汉姆联生物
摘要：采用平板生長抑製法、菌絲生長速率法和袍子萌發試驗法檢測了幾種抑菌劑對植物組織培養中常見細菌和真菌的抑菌作用．結果表明．Yl 一1 抑菌作用具廣譜性，其對微球菌、葡萄球菌最低抑菌濃度均為62.5mg/L；對棕曲黴、黑青黴菌絲生長最低抑菌濃度分別是15.625 、7.812 5mg/L ；對棕曲黴、黑青黴孢子萌發最低抑菌濃度均為3.906 25 、62.5 mg / L 的Yl 一1 對馬鈴薯試管苗生根、分化及生長無抑製作用，且在開放組培中未發生汙染，可用作開放性植物組織培養中的抑菌劑．
關鍵詞：抑菌劑；細菌；真菌；植物組織培養
利用植物組織培養技術進行無性繁殖的方法已取得了很大的進展，與傳統的植物繁育方法相比，這方法具有快速高效，不受季節限製，有時還結合“脫毒”技術取得防止帶病退化、增強生活力及較好地保持種性的效果．然而，在植物組織培養過程中，常發生較高頻率的微生物汙染，阻礙了組織培養快繁技術的應用．因此，預防和抑製試管苗中微生物，對提高試管苗的快繁率，具有十分重要的理論意義和應用價值．目前，國內有關抑製試管苗汙染微生物的研究不夠廣泛、深人，不能全麵解決問題．本研究從5 種農藥中篩選出2 種作為抑菌劑，研製了一個配方，並研究了農藥對植物生長、分化、生根的影響．此外，本實驗對開放組培的可能性進行了初步研究，期望在植物組織培養方麵取得一定的突破．
1 材料與方法1.1 供試材料
1.1.1 供試藥劑 50 ％多菌靈可濕性粉劑、70 ％代森猛鋅可濕性粉劑、Yl 一1 、57.6 ％冠菌清幹粒劑、50 ％撲海因懸浮劑、75 ％百菌清可濕性粉劑．
1.1.2 供試菌種 微球菌（Micrococcus）、葡萄球菌（Staphylococcus）、棕曲黴、黑曲黴、黑青黴、杜氏青黴都是從被汙染的培養植物上分離純化獲得．
1.1.3 培養基 YEB 培養基；PDA 培養基．
1.2 試驗方法
1.2.1 汙染細菌鑒定革蘭氏染色法初步鑒定細菌．
1.2.2 抑菌強度測定無菌水稀釋藥劑成1 000 mg / L ．細菌取0.2 mL 對數期菌懸液（真菌取0.2 mL 孢子菌懸液（106 個／mL ) ）與20 mL YEB （真菌PDA ）培養基混勻倒平板．凝固後每一平板置2 個牛津杯（直徑8mm ) ，一杯加O.2mL 藥劑，另一杯以無菌水作對照，置於28 ℃ 溫箱培養，葡萄球菌培養24h 、微球菌和真菌培養48h 後，取出測抑菌圈直徑．
1.2.3 細菌最低抑菌濃度測定 用無菌水稀釋藥劑成2 000 mg / L 原液，然後按1 : 2 , 1 : 4 , l : 8 ．二稀釋至15.625 mg / L ，餘下均同1.2.2.
1.2.4 菌絲生長抑製實驗 用無菌水配製成106 個／mL 孢子懸浮液，分別取0.2 mL 孢子懸浮液與20 mLPDA 培養基混勻倒平板，28 ℃ 溫箱遮光培養48h 後備用．用無菌水稀釋藥劑成2 000 mg / L 原液，然後配製成1 000 , 500 , 250……0.9765625mg /L 的含藥培養基，對照為不加藥的培養基．用打孔器（直徑7 mm ）從備用平板中打取菌餅，菌絲麵朝下接種於含藥培養基中央，每平板加一個菌餅，3 次重複，28 ℃ 溫箱遮光培養，每2d 取出測量菌落直徑．
生長抑製率（% ）={（對照菌落直徑一菌餅直徑）一（處理菌落直徑一菌餅直徑）/ （對照菌落直徑一菌餅直徑）} *100 %
1.2.5 袍子萌發抑製試驗 將孢子接種於液體PDA 中，於28 ℃ 、130 rad / min 搖床上培養24h ，雙層紗布過濾後用無菌水調製成104 個／mL 備用．用無菌水稀釋藥劑成2 000 mg / L 的原液，然後配製成1000 、250、62.5 ……0.9765625mg / L 的含藥培養基．分別取2mL 孢子懸浮液與不同濃度的含藥培養基混勻，3 次重複，28 ℃ 培養，72h 後鏡檢計算孢子萌發抑製率.
孢子萌發抑製率（% ）={（對照萌發率一處理萌發率）／對照萌發率｝x100 %
1.2.6 對植物生長抑製試驗與開放組培初探用無菌水配製藥劑成2 000 mg / L 原液，4 000 rad / min 離心10min ，上清液用孔徑20nm 的濾膜過濾備用．將濾好的原液與培養基混合配製成1000 、250 、62.5 mg / L 的含藥培養基．取健壯的馬鈴薯試管苗剪成小段，接種於上述含藥培養基，對照為不加藥的培養基，每梯度6 瓶，每瓶10 株，其中3 瓶正常放置，3od 後觀察馬鈴薯生長情況，另外3 瓶開口放置，20d 後觀察馬鈴薯的汙染情況．
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