摘要：采用不同的滅菌措施，包括不同的滅菌劑、濃度，對魚腥草的帶芽莖段進行滅菌處理，研究其汙染率和汙染速率的變化，尋找建立無菌培養係最適宜的方法。結果表明：最適宜的滅菌措施為：外植體莖＋70 ％酒精浸30s + 0.1 % 升汞10-12min ＋青黴素＋鏈黴素15min 。
關鍵詞：魚腥草；無菌培養係；汙染率
魚腥草為三白草科植物蕺菜的全草。其以味似魚腥而得名，是多年生的草本植物，又名側耳根、臭根草、魚鱗草等，具有清熱解毒，消癰排膿，名利尿通淋等功能，用於痰熱喘咳、熱痢、熱淋、癰腫瘡毒等。其嫩葉、根莖可食用，為長江以南各省區大眾喜愛的美味。魚腥草具有廣譜的抗菌作用，對免疫功能也有一定的增強效果。目前，魚腥草被國家衛生部正式確定為“既是藥品，又是食品”的極具開發潛力的資源之一。國內對魚腥草的分布、栽培、化學成分、藥理、臨床應用及提取成分均有研究，並利用組織培養技術，研究魚腥草再生植株。但在研究過程中魚腥草的外植體易受汙染，本研究是通過建立魚腥草的再生植株體係，旨在為魚腥草栽培和開發利用提供新技術參數和理論依據。
1 材料與方法
1.1 材料魚腥草當年生幼嫩的莖段取自安徽省廣德縣。
1.2 方法取魚腥草莖段用流動清水衝洗後，采用不同方法對外植體進行滅菌處理，對滅菌劑的種類，處理時間等進行了細致的設計和篩選，共設計了以下24 種不同的滅菌措施。
魚腥草外植體滅菌措施為：第1 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉8min ；第2 組70 ％酒精30s, 10 ％次氯酸鈉10min ；第3組70 ％酒精30s, 10 ％次氯酸鈉10min ；第4 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉20min ；第5 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞5min ; 第6 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞8min ；第7 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞10min ；第8 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞12min ；第9 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉8min ，青黴素15min ；第10 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉8min ，青黴素＋鏈黴素15min ; 第11 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉10min ，青黴素15min ; 第12 組70％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉l0min ，青黴素十鏈黴素15min ；第13 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉15min ，青黴素15min ；第14 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉15min ，青黴素＋鏈黴素15min ；第15 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉20min ，青黴素15min ；第16 組70 ％酒精30s , 10 ％次氯酸鈉20min ，青黴素＋鏈黴素15min ；第17 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞smin , 青黴素15min ；第18 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞5min ，青黴素＋鏈黴素15min ；第19 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞8min ，青黴素15min ；第20 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞8min ，青黴素＋鏈黴素15min ；第21 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞10min ，青黴素15min ；第22 組70 ％酒精30s , 0.1%升汞10min ，青黴素＋鏈黴素15min ；第23 組70 ％酒精30s, 0.1 ％升汞12min ，青黴素15min ；第24 組70 ％酒精30s , 0.1 ％升汞12min ，青黴素＋鏈黴素15min 。
2 結果與分析
2.1 滅菌措施對外植體莖的滅菌效果的影響 詳見表1 。由表1 可以看出，經過不同的滅菌措施處理的接種材料莖，其滅菌效果差異明顯。滅菌效果好的是第15 、16 、22 、23 、24 組；但15 、16 組褐化率較高，分別為75 ％和91.7 % ，滅菌效果較好的是第7 、8 、24 組；滅菌效果差的是第1 、2 、9 、10 組。綜合滅菌效果和褐化情況，21 、22 、23 、24 組滅菌措施對莖段滅菌效果最好。
2.2 滅菌措施對外植體莖的菌類侵染的抑製效果各種不同滅菌措施對外植體莖段的菌類的抑製能力如表2 所示。在設計的24 組滅菌措施中以16 組和24 組表現出對材料上菌類的滋生侵染的抑製效果最強，接種後一直沒有被汙染，汙染率是伍其次，抑製菌滋較好的是第4 、7 、8 、15 、22 、23 組，接種後第4d 才出現汙染，汙染率低；抑製菌滋生效果最差的是第l 、2 、5 、9 、10 、11 、12 、17 、18 組，接種第3d 出現大量汙染，累計汙染率為100 %。
2.3 抗生素對材料滅菌效果的影響根據第11 、12 組與第2 組滅菌措施的比較，兩組培養基完全相同，第11 組用了單獨青黴素滅菌，而第12 組采用青黴素，鏈黴素混合液處理，其他滅菌藥劑，濃度，處理時間均相同。結果表明，第12 組材料滅菌效果略優於第2 、11 組，第13 和14 與第3 組，，第15 和16 與第4 組，19 和20 與第5 組，21 和22 與第6 組，23 和24 與第7 組比較又同樣得出以上結論。說明青黴素，鏈黴素混合液對外植體滅菌有一定的積極作用，比不用或單獨用青黴素滅菌效果好。
3 小結與討論
根據上述的研究結果，對魚腥草組培中無菌培養係建立的具體技術措施總結：( 1 ）對魚腥草對外植體莖段滅菌效果最佳的處理措施為：外植體＋70 ％酒精30s + 0.1 ％升汞10 一12min ＋青黴素＋鏈黴素15min ; ( 2 ）青黴素和鏈黴素混合液浸泡外植體有一定的滅菌效果，比單獨用青黴素滅菌效果好。青黴素和鏈黴素混用對菌類滋生的抑製效果好，比單用青黴素對菌類滋生的抑製效果強。（3 ）魚腥草的外植體莖用升汞滅菌的滅菌效果及對菌類滋生的抑製效果比用10 ％次氯酸鈉處理效果好。
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